解放军文职招聘考试扫描电子显微镜样品制备

 扫描电子显微镜样品制备

一、扫描电镜生物样品的制备原则

（一）生物样品的特点

 1、生物样品的主要特点是含水量较高，质地较软，脱水干燥后易出现皱缩、变形，例如一个苹果，失水干燥后表面出现许多皱纹；

2、生物材料机械强度低，对电子束的轰击耐受能力差；

3、生物材料由原子序数较低的元素如碳、氢、氧、硫、磷等所组成，因而不易被激发产生二次电子；

4、少生物材料的形貌结构易受PH、渗透压、湿度等环境变化的影响。

（二）扫描电镜生物样品制备原则

1、尽可能完好地保持样品表面形貌：这就要求取材小心，注意保护好所要观察的面（如肠腔、血管腔、肺泡腔），使其不受损伤，并将材料进行适当的清洗，以除去表面的覆盖物，但又不要损伤表面形貌。及时进行固定，使样品保持自然形态，停止其运动，保持样品内部细胞的正常结构。固定还能使标本硬化，提高对后处理过程中的物理应力的耐受性。

2、使样品脱水干燥并避免因干燥引起的变形：若将含有水分的样品放入电镜样品室，由于样品水分的挥发必将破坏镜筒的真空，影响电子束在镜筒内的行进，影响其在样品表面的扫描，不能形成清晰地图像。另一方面，含水样品在真空下条件下，水分挥发干燥样品表面皱缩干瘪变形，失去其原来的形貌，也就失去了电镜观察研究的价值。因此对一切含水样品必须进行脱水干燥处理。临界点干燥法是目前普遍采用的干燥方法。

增加样品表面的导电性和二次电子发射率：生物样品与金属样品不同，前者导电性不良，电阻率高，当扫描电子束轰击样品表面时，可能发生电荷累计充电，受轰击区电子蓄积，与邻近区域之间产生电位差，甚至会出现放电现象。而充电区的负电荷对后续的扫描电子又将产生排斥，影响其激发二次电子的能力，使二次电子轨迹偏斜甚至紊乱，影响成像。另外，生物样品主要是由低原子序数元素构成，受电子束照射时，二次电子发射率低，讯号弱，成像质量差，因此在进行电镜观察前，需要对样品表面进行处理，使之导电性增高，表面二次电子发射率增加。为此，可在样品表面进行金属镀膜或组织导电处理等。金属膜代替样品表面发射二次电子，发射率提高，图像讯号增强，并且可防止样品的荷电效应。