解放军文职招聘考试半薄切片

半薄切片

 (一)半薄切片观察的目的和意义

选区和细胞学观察

半薄切片的厚度：0.5~2µm

(二)半薄切片的主要步骤

1、修块及切片

2、半薄切片染色：甲苯胺蓝染色 和 H-E染色

三、超薄切片

(一)超薄切片的准备工作

1、包埋块的再修整

2、载网和支持膜的制备

（1）载网:

常用的有铜网、镍网，多用200~300目，新的载网用前需进行清洗，用丙酮、乙醇浸泡清洗数次即可

（2）支持膜

氯仿配制的0.2%~0.4%Formvar(聚乙烯醇缩甲醛)液制备支持膜

3、切片刀的制备

（1）玻璃刀：玻璃刀的制备、选择，刀槽

（2）钻石刀

（二）超薄切片                                                               

1、超薄切片机的基本原理                               

    超薄切片机的主要部件是进给机构，它的主要部分是一个活动臂，将修好的包埋块固定在它的一端，进给机构携带着包埋块向刀的方向微小推进，同时活动臂又向下进行切割运动，切下一定厚度的薄片。

2、切片

     主要步骤包括：装块、装刀、对刀、向刀槽注双蒸水、切片。

     注意：切片时避免振动，保持室内温度恒定。

3、展片与捞片：扣网法或牵引法将切片转移到载网上

4、切片厚度的判别 ★

    一般利用切片产生的反射光干涉色来判定切片的厚度，它是在日光下由于切片表面反射光与切片下水面反射光发生干涉，使不同厚度的切片在显微镜下呈现不同的干涉色。干涉色与切片厚度近似值关系如下：

灰  色：40~50 nm

银白色：50~70 nm

金黄色：70~90 nm

紫  色：90 nm以上

四、染色

1、定义

 为了充分显示细胞的微细结构，就要增加超薄切片样品结构对电子的散射能力，改善反差，这种提高反差的方法叫电子染色

2、电子染色现象

 以高原子序数的重金属盐作为染色剂，染色中的重金属盐离子能与细胞的某些结构成分结合或吸附，而且不同的结构结合能力不同，因而在电镜观察时，各种细胞结构对电子产生不同程度的散射，最后得到反差对比明显的图像。

3、电子密度的概念

4、常用的电子染色剂

（1）醋酸铀：主要提高核酸、核蛋白和结缔组织纤维成分的反差，但对膜染色效果差。

注意： 1、醋酸铀遇光易分解，应密封避光保存；

            2、铀具有放射性，操作时应采取防护措施。

（2）枸橼酸铅：主要与切片中的还原锇作用，提高膜系结构和脂类的反差。

注意： 铅极易与空气中的二氧化碳结合生成碳酸铅而造成切片污染，所以保存时隔绝空气。

5、染色方法

（1）超薄切片双重染色：先铀染后铅染

（2）块染色：组织块经四氧化锇固定后，脱水之前，可将之用醋酸铀饱和液整体染色30min，不仅能提高反差，而且能增强组织成分的稳定性。待包埋切片后再用铀-铅双重染色。