- 讲师:刘萍萍 / 谢楠
- 课时:160h
- 价格 4580 元
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样本的初步处理
生物样品主要分为两大类:
一类是含水量少质硬的结构,如毛发、牙齿、植物花粉、孢子、种子等。这类样品含钙、矽、纤维素等成分,所以只需要进行表面清洁、装台(粘胶)、导电处理即可观察。
另一类是含水量较多的组织,如动物的组织器官属于此类。这类样品需经取材、清洗、固定、脱水等初步处理,再经干燥处理和镀膜才能进行观察。
(一)取材
注意保护观察面,所切取的样品比透射电镜样品大些,可视样品台的大小而变化,一般应小于10mm2,并尽可能薄,厚度在5mm以下,若样品是悬浮细胞则应注意不要过稀或过密。
(二)清洁表面
清除表面粘液、杂质、灰尘等附着物,充分暴露样品表面。常用的清洗液有蒸馏水、生理盐水、缓冲液及含酶的清洗液等。根据研究对象样品性质特点,采取不同的清洗方法。例如动物脏器腔面含有较多粘液,用含酶的清洗液洗效果好。附着在微绒毛及表面凹陷处的微小杂质颗粒,一般漂洗不易清除,可配以超声波清洗方法。对于表面干燥的样品,可用吹气球或软毛笔轻轻扫除的方法清洁表面。
(三)固定和脱水
固定、漂洗和脱水等处理所用试剂基本上同于透射电镜样品的制备方法。
常用的固定方法是戊二醛—四氧化锇双重固定法,是目前公认的最好的方法。
三、样品的干燥
脱水后,需要将样品中的化学脱水剂彻底挥发干净,这就是样品的干燥。
样品干燥的方法有:
(一)空气干燥
(二)真空干燥
(三)冷冻干燥 将新鲜未经固定的生物标本快速冷冻,然后在低温真空条件下,使样品中水分由冰态升华而达到干燥的目的。由冰态升华为气态的过程,不形成液气界面,所以消除或减少了表面张力引起的样品变形损伤,效果较好,但升华所需时间较长。
(四)临界点干燥
责编:刘卓
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