解放军文职招聘考试糖原及粘液染色法

 糖原及粘液染色法

 

糖原又名肝糖，它贮藏于肝细胞及肌细胞浆中，其形状为大小不等的颗粒，遇碘则变褐色，易溶于水，机体坏死后，糖原即受到破坏，因此须采取新鲜标本，并及时固定。糖原不等于糖类，只是糖类的一种。

糖类从组织化学技术的角度分类与生物化学的分类并非一致。从组织化学的角度，糖类可略分为多糖、中性糖液物质和酸性粘液物质及粘蛋白和粘脂质。

多糖主指糖原，是由许多葡萄糖分子以糖苷键组成的聚合体。当机体死亡，即很快分解为葡萄糖。

一、过碘酸—Schiff氏法（简称P.A.S）

操作方法：

（1）    石蜡切片脱蜡至水。

（2）    0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液（过碘酸再结晶应重新配制使用）。

（3）    蒸馏水洗，70%酒精洗。

（4）    Schiff氏液15-30分钟。（Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用）

（5）    流水冲洗10分钟。

（6）    苏木素浸染细胞核2-3分钟。

（7）    脱水、透明、封盖。

结果：糖原呈红色，细胞核呈蓝色。

试剂配制：

（1）0.    5%过碘酸（HIO4）水溶液或70%酒精溶液。

（2）Schiff氏试剂。

碱性品红                             1g

蒸馏水                               200ml

1N盐酸（98.3ml比重1.16盐酸，加入蒸馏水成1000ml） 20ml

偏重亚硫酸钠或钾                         1g

碱性品红1g加入200ml蒸馏水，搅拌加热沸腾，待冷却至50℃过滤，加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处，两天后溶液变桔黄色或草黄色，然后加入少量活性碳并震荡、过滤，此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色，染色效果较差。

注意事项：

1、    糖原的固定要及时，而且标本要新鲜。

2、如用无水酒精作糖原的固定剂，有它的弊病，因无水酒精渗透较慢，而且容易产生极化，（极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端）。故用Gendre氏固定液效果较佳，其配法如下：

苦味酸饱和于95%酒精       85ml

40%甲醛                 10ml

冰醋酸                 5ml

3、各种试剂必须化学纯，亚硫酸钠须有浓厚气味，器皿必须洁净而干燥，染色缸亦是。

4、如果Schiff氏试剂，在经过活性碳吸附漂白后不显无色，首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓，使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身，常常虽属同一生产厂家，但不同批号，其效果就可能不同，应特别引起注意。

二、粘液染色法：

粘液一般有以下几点特性：

（1） 对盐基性染料有亲合力，因此在HE染色中、切片上的粘液呈污秽蓝色。

（2） 对某种盐基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺蓝有异染性。

（3） 遇醋酸发生沉淀，胃粘蛋白则除外。

（4） 溶于弱碱溶液。

常用的粘液染色有以下几种：

1、P．A．S染色法：

操作方法同前，结果；中性粘液性物质，某些酸性粘液物质呈红色，核呈蓝色。

2、AB/P.A.S染色法：

该种方法的特点是能同时显示出酸性和中性粘液物质。

操作方法：

（1）    切片常规脱蜡入水。

（2）    3%醋酸液洗2分钟，入1%阿利新兰醋酸液（PH2.5）10-20分钟。

（3）    蒸馏水洗。

（4）    按P.A.S染色程序。

（5）    苏木素淡染2-3分钟，水洗。

（6）    常规脱水、封片。

  结果：酸性粘液呈蓝色，中性粘液呈红色，混合性粘液呈紫色，细胞核呈淡蓝色。

  3、高铁二胺（HID）/AB染色法：

该种方法的特点是能同时显示酸性粘液和硫酸粘液物质。

操作方法：

（1）    切片常规脱蜡入水。

（2）    入高铁二胺溶液反应18-24小时（或37℃过夜）。

（3）    蒸馏水洗。

（4）    接AB（PH2.5）染色程序。

（5）    常规脱水封片。

结果：酸性粘液物质呈蓝色，硫酸粘液呈棕黑色。

试剂配制：

（1）1%阿利新兰醋酸液（PH2.5）

阿利新兰               1g

冰醋酸               3ml

蒸馏水               97ml

（2）高铁二胺（HID）液

二甲基间苯二胺二盐酸盐     1.2g

二甲基对苯二胺二盐酸盐     0.2g

40%氯化铁             1.4ml

蒸馏水               50ml

临用时新配。溶液PH值1.5-1.6