解放军文职招聘考试脂类染色法

 脂类染色法

脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。

脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。

在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。

脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。

一、    苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)染色法：

操作方法：

（1）    固定于10%甲醛的组织。

（2）    水洗后采用冰冻或石蜡切片。

（3）    经蒸馏水后，浸染于Harris苏木素 或明矾苏木素中淡染1-2分钟。

（4）    自来水冲洗。

（5）    水洗后，移入70%酒精5秒钟。

（6）    投入苏丹Ⅲ染液中约30分钟或更长时间，置于56℃温箱中。

（7）    在70%酒精中洗涤5-10秒钟。

（8）    洗于蒸馏水中，然后将切片移于载玻片上。

（9）    切片移于玻片上，将切片周围的水分小心擦掉。

（10）    甘油明胶封固。

结果：脂肪呈橙红色或鲜红色或黑色，胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。

试剂配制：

1. 苏丹Ⅲ染液配法：将0.15克苏丹Ⅲ溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。

注：浸染时，容器必须盖好，否则酒精或丙酮挥发，染料沉淀。

2.甘油明胶配制：

明胶         40g

蒸馏水       210ml

甘油         250ml

石碳酸结晶     5ml

先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间，然后加甘油和石碳酸，加热15分钟，摇搅直至混合液均匀为止。

二、苏丹Ⅳ(Sudan Ⅳ)染色法：

苏丹Ⅳ又名猩红，是苏丹Ⅲ的衍生物，作为脂肪染剂，经各地实验证明，其结果优于苏丹Ⅲ。

其染色步骤与苏丹Ⅲ染法完全相同，从略。

试剂配制：

将1-2克猩红染剂加纯酒精70ml，10%氢氧化钠20ml，蒸馏水10ml，制成混合液，以微火加热，置37℃温箱中1小时，取出冷却后过滤，12小时后即可使用。

注：此液5天内失效，如此看来，浪费较大，建议配制70%酒精饱和液，或纯丙酮和70%酒精饱和液，它们使用方便，且不易失效。

结果：脂肪呈猩红色，比苏丹Ⅲ更为清晰。

三、油红染色法：

油红作为脂肪染色剂，其染色步骤简便，染色结果肯定，并且优于苏丹Ⅳ。

试剂配制：

油红O           0.5g

异丙醇（含量98%）   100ml

此为油红饱和液，可长期保存备用。

染色步骤：

（1)    冻切片

（2)    蒸馏水充分洗涤。

（3)    油红稀释液染10-15分钟，避光、密封。油红稀释液的配制：

（4)    取油红饱和液6毫升，加蒸馏水4毫升，静置5-10分钟后过滤后使用。

（5)    60%乙醇镜下分化至间质清晰。

（6)    水洗。

（7)    Marry氏苏木素复染核。

（8)    水洗。

（9)    甘油或甘油明胶封片。

结果：脂肪呈鲜红色，细胞核呈蓝色，间质无色。

注意事项：

1.    油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀。

2.    60%乙醇分化，应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色，间质无色时为度。