解放军文职招聘考试网状纤维染色法

 网状纤维染色法：

网状纤维是非常细而短的纤维，大量堆集时则形成致密的网状，故有网状纤维之称。又因这种纤维只有以银盐镀染才能看见，所以又称嗜银纤维。它主要分布于肝、脾、骨髓、淋巴组织等造血器官，在病理情况下，常出现于炎症增生和肿瘤性增生组织中。

网状纤维染色，常作用于某些肿瘤的鉴别诊断，如癌与肉瘤的鉴别。还可作为恶性肿瘤的发生以及预后的观察。

网状纤维的染色方法很多，但都是嗜银浸染法，虽然各法操作步骤及染液的配制有所不同，其基本原理还是相同的。由于组织内的蛋白质与银化合物的结合，再经过还原而成为金属银，沉积于组织内及其表面，因此得以着色。

操作方法：（Gomri氏染色法）

(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗。

(2)0.25％过锰酸钾5—10分钟。

(3)5％草酸漂白1－2分钟，以切片呈白色为度。

(4)流水洗，经蒸馏水洗。

(5)2％铁明矾媒染5—10分钟。

(6)蒸馏水速洗。

(7)双氨氢氧化银溶液（Gomori氨银溶液）3—5分钟。

(8)10％福尔马林还原0.5—1分钟。

(9)蒸馏水洗。

(10)以0.2%氯化金调色3-5分钟。

(11)蒸馏水洗。

(12)于5%硫代硫酸钠中固定1-2分钟。

(13)自来水洗数分钟。

(14)常规脱水，透明，封固。

结果：网状纤维黑色，胶原纤维黄色—桔黄色，细胞核呈灰黑色。

试剂配制：

双氨氢氧化银（Gomori氏氨银）溶液配制：

取10%硝酸银溶液5ml于量杯中，缓慢地逐步滴加入28%氨水，开始产生褐色沉淀，继之淀渐渐溶解，恰好溶解完为止，然后加入3%氢氧化钠5ml，再产生黑色沉淀，再滴加28%氨水，直到仅有微量沉淀为止，加蒸馏水至50ml过滤使用。此液配制后，可放入冰箱内保存1-2周，用时升至室温即可，应贮存于棕色瓶内。

三、弹力纤维染色法

弹力纤维较细，直径0.2-1微米，且坚固，弹性大，容易伸展，纤维分枝连接成网，没有原纤维，量少时不易与胶原纤维区分，量多时才可识别。HE染色与胶原纤维着色相似，若用弹力纤维染色法，则可分辨的很清楚。例如，观察血管弹力层的异常。

弹力纤维具强嗜酸性，用升汞，酒精固定染色较佳，适于福尔马林固定。

操作方法：

1.    Weigert氏弹力纤维染色法：

（1）    标本用Zenker氏液，酒精或10%甲醛固定均可。

（2）    石蜡或冰冻切片。

（3）    染色前的程序，按照常规进行。

（4）    水洗后，入Weigert氏染色液2-6小时或更长的时间，一般依染色液的新旧而定 。

（5）    切片从染液中取出，直接浸入1%盐酸酒精或酒精中进行分化。

（6）    如需复染细胞核，可染于明矾苏木素溶液中10分钟。

（7）    冲洗后，可再以Ven Gieson氏染液作对比染色1-2分钟。

（8）    95%酒精分化、脱水、透明、封固。

结果：弹力纤维呈暗蓝色，细胞核呈蓝色，胶原纤维呈红色，肌纤维呈黄色。

注意事项：

Weigert氏弹力纤维染色的配制已有许多改变，盐基性复红（碱性品红）可由其它盐基性染料取代，如甲紫、焦油紫（结晶紫）、维多利亚兰等。配制时如将结晶紫1克加盐基性复红1克，则弹力纤维染成兰绿色；全用甲紫或结晶紫，弹力纤维则呈暗绿色。亦有将染液以酒精加倍稀释，并相应增加盐酸量，之后延长染色时间，染色时间可达数小时甚至过夜，对纤细的弹力纤维显示更好。

试剂配制：

盐基性复红（碱性品红）               1g

间苯二酚（雷锁辛）                 4-5g

蒸馏水                         200ml

29%三氯化铁水溶液                 25ml

95%酒精                         200ml

  浓盐酸                         4ml

先将盐基性复红（碱性品红）溶于200ml的蒸馏水中，加入4-5g间苯二酚，加温煮沸（不停搅拌），然后加入25ml的29%三氯化铁水溶液，继续搅拌煮沸2-5分钟，冷却后过滤倾去滤液，将滤纸及沉淀物置于温箱中烘干。而后将滤纸和干燥的沉淀物一并投入烧杯，加200ml95%酒精，小心隔水加热，徐徐搅拌使沉淀溶解，然后弃去滤纸冷却后，补足因加热蒸发的酒精。最后加入4ml的盐酸即可应用。（对苯二酚可代替间苯二酚）。

2.    Verhoeff氏弹力纤维染色法：

操作方法：

（1）    切片常规脱蜡。

（2）    Verhoeff染液15-60分钟。

（3）    以2%三氯化铁分化（镜下控制）。

（4）    水洗再以95%酒精洗去碘。

（5）    流水洗。

（6）    以苏木素-伊红或Ven Geison氏染液复染。

（7）    脱水、透明、封固。

结果：弹力纤维蓝黑色，其它组织视复染而定。

注意事项：这种染色法染液配制简单，但对微细弹力纤维不如Weigert氏效果好。

试剂配制：

将1克苏木素加热溶于20ml的无水酒精，冷却后，加1%三氯化铁水溶液8ml搅拌；再加入 8ml的Lugoi碘液（碘1克，碘化钾2克，蒸馏水100ml）搅拌混合而成。染液仅可存放2-3周。