- 讲师:刘萍萍 / 谢楠
- 课时:160h
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切片机
切片机是切制薄而均匀组织片的机械,组织用坚硬的石蜡或其他物质支持,每切一次借切片厚度器自动向前(向刀的方向)推进所需距离,厚度器的梯度通常为1微米。切制石蜡包埋的组织时,由于与前一张切片的蜡边粘着,而制成多张切片的切片条。
切片机的基本类型的五种,按其结构叫做(1)摇动式切片机,(2)轮转式切片机,(3)滑动式切片机,(4)推动式(雪橇式)切片机,(5)冰冻切片机。普通最常用的是轮转式切片机。
轮转式切片机:
系借转动手摇轮进行切片动作。蜡块台镶装于可在沟槽内上下运动的金属夹座中,借微动螺旋向前推进切断平整的切片。有的转轮式切片机的机头上装有三只旋钮和一个紧固旋钮能使其向各个方向偏转并紧固,便于调整蜡块的切面。切片刀的切制角度可以调整(切片刀倾斜)。由于这种切片机上使用的是一种重而大的切片刀,故除切制硬组织时一般不发生颤动。切片厚度借旋钮可以1—30微米之间调至任何厚度,每一梯度为1或2微米。
轮转式切片机的优点是机体较重,故此摇动式切片机稳定,非常适于切制石蜡切片,可以理想的切制连续切片,亦用以切制大组织块。
第三节 石蜡切片的制作
以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外,石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中最普通常用的一种方法。
一、 切片前的准备:
1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。
2、蜡块整修,将蜡块组织面的石蜡用刀修去,使组织全部暴露出切面并修平,以减少切片刀的磨损。将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上,全部切除;否则切片容易皱褶。组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平;石蜡不须留得过多,应尽量少留,以保持组织间距的最小限度。这样切下的切片既呈带状,也不弯曲。片距小,在贴片时就可相应多贴片,有利于检查诊断。修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边,要是大片修切易使蜡块断裂露出组织;遇此情况应返入新蜡再次包埋。
3.载玻片应事先洗涤干净,无油腻和不透明现象,应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗,再烤干备用。根据切片需要张数,每片涂上一层极薄的蛋白甘油,插于载片板(或载片架)上备用。
蛋白甘油的配制:取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。此法主要是防止脱片,实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。
4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内,调整角度和位置后随即紧固,检查切片刀的倾斜度是否正确,倾角过大、则切片上卷;倾角过小则切片皱起,以20°-30°为佳。
5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。
二、切片的步骤:
1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内,调整到稍离开切片能够切到的位置上,注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。
2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触,旋紧刀架,固定好机头。
3、根据需要调整切片厚度。
4、摇动切片机手轮先进行修整切片,直到切出完整的最大组织切面后,再进行切制。
5、实践中可用右手转动切片机手轮,左手用毛笔托起蜡片,协调地进行切片操作。
6、切下的切片带,一端用镊子轻轻拉起,应尽可能将切片带拉直展开,用毛笔将切片带从刀口向上挑起,拉下切片带,然后轻拖铺于恒温水面上。
三、切片的注意事项
1、切片质量的好坏,除与技术熟练程度和切片机的好坏有关外,切片刀是决定的因素,所以刀一定要磨得十分锋利。否则在切片时会自行卷起或皱起,或将组织划伤出现刀痕,更不能顺利地将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺口存在,将使制成的切片断裂、破碎,不完整,切片时应时时擦净刀口。
2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧,否则将会产生震动。在每次更换蜡块时,应习惯地检查一下组织块是否夹紧,切片刀是否稳固,稍有疏忽就会影响切片质量,甚至将蜡块全部切坏,造成不可弥补的后果。在切制切片的开头阶段如出现切制不良与其他故障,最常见的原因是蜡块或切片刀的松动所致。
3、在摇动切片机时,用力要求均匀一致,不宜过重过猛,否则可因用力过重而使机身震动,造成切片厚薄不均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时,更应该轻轻切削,以防组织由于震动形成空洞现象。
4、在夏秋季节进行切片时,应使用冰块加强冷却,这样不仅可保持石蜡的硬度,同时也减少了切片的褶皱,给切片制作带来方便。
四、贴片:
1、将单张或数张切片,用镊子夹住蜡片的一边并提起,铺于恒温水中,(光亮的一面朝下)立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开,注意不可拨破组织。然后分开每张切片,选取其中最完整的,没有皱褶的切片。
2、待切片在恒温水内充分摊开展平后,将载玻片垂直插入水中以涂有蛋白甘油面轻靠切片,并用毛笔将切片一边拨于玻片上,随即将玻片直立提起,趁玻片上仍有少量水份时用毛笔,拨正切片位置。如组织较小,可在玻片上多贴几片或几排,但排列应密集、整齐。
3、用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号,字要写得小而清楚、端正。
4、将附贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时,蛋白质凝固后即可进行染色。
责编:刘卓
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