解放军文职招聘考试过氧化物酶染色法

 过氧化物酶染色法（POX）

1.原理    细胞内的过氧化物酶（peroxidase）能将底物的过氧化氢分解，产生新生态氧。后者将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，它是一种不稳定的中间产物，无需酶的作用进而变成棕色化合物沉淀于酶的所在部位。

2．试剂

（1）第一液

联苯胺                        0.3g

360g/L亚硝基铁氧化钠饱和液    1ml

95%乙醇                      加至100ml

贮存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分装备用。

（2）第二液（稀过氧化氢液，新鲜配制）

3%过氧化氢            0.3ml

蒸馏水                 25ml

3．方法

（1）于新鲜干燥血涂片或骨髓涂片上,  滴加第一液5~8滴,使盖满整个血膜，作用1~2分钟。

（2）滴加等量的第二液，混匀，染4~8分钟。

（3）勿倾去染液，直接用水冲洗。

（4）干燥后再用瑞氏染液复染。

4．结果

  阴性：无蓝色或蓝棕色颗粒。

  弱阳性：蓝色或蓝棕色颗粒小，分布较稀疏。

  阳性：蓝色或蓝棕色颗粒略粗，分布较密集。

强阳性：蓝色或蓝棕色颗粒粗大。

5. 质量保证

（1） 联苯胺配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%的乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向内渗入而作用减弱。

（2） 过氧化氢需新鲜配制，其浓度与加入量勿随意更改。

6.临床意义

（1） 白血病类型：原始及幼稚细胞

                              阳性强：AML

① 阳性率≥3%：ANLL

                              弱阳性：AMOL

② 阳性率＜3%：ALL

（2） 成熟中性粒细胞过氧化物酶变化

（3） 活性↑：ALL、CLL、感染、AA等。

活性↓：AML、AMOL。

（1）            恶组细胞：（－）

二、血液生化试验（选做4学时）

掌握：Coombs试验、蔗糖溶血试验、Hb电泳及HbF等试验的操作方法，结果判定，正常值及临床意义。

熟悉：Coombs试验、蔗糖溶血试验、Hb电泳及HbF等试验的原理。

了解：Coombs试验、蔗糖溶血试验、Hb电泳等试验的试剂配制方法。

（一）抗人球蛋白试验（Coombs试验，直接法）

1.原理    抗人球蛋白试验（Coombs试验）是用于检验不完全抗体的试验。用正常人血清、血浆或血浆球蛋白注射免疫家兔，使兔体内产生抗人球蛋白抗体（温反应抗体）。其方法有直接试验和间接试验两种。直接试验的目的是检查病人红细胞表面的不完全抗体、即经盐水洗涤后的致敏红细胞悬液中加入抗人球蛋白血清，观察是否发生凝集，发生凝集者为Coombs直接试验阳性。

2. 试剂

  抗人球蛋白血清，生理盐水。

3. 方法

（1） 取受检者脱纤维红细胞用生理盐水洗涤3次。然后配成20%红细胞生理盐水悬液。

（2） 将抗人球蛋白血清按1:2、1:4、1:8、1:16的比例稀释。

（3） 取一块白瓷板，将上述各稀释度抗血清各1滴，然后分别加20%红细胞1滴，混匀，5分钟后观查结果。

4. 结果

     不凝集为阴性，凝集为阳性。按效价报告。

5. 正常参考值

     正常红细胞Coombs试验直接反应呈阴性。

6. 质量保证

（1） 标本应新鲜。当天进行试验，否则反应减弱甚至呈阴性。

（2） 红细胞应充分冼涤，除去吸附的血浆球蛋白，以免中和抗人球蛋白而出现假阴性。

（3） 冷凝集素很高的血标本，试验前应保持在37℃，并用温热盐水冼涤。

（4） 抗凝剂对强抗体无明显影响，但可能对弱抗体或补体有影响。因此以脱纤维蛋白血为好。

7.临床意义

（1） 自身免疫性溶血性贫血时Coombs直接试验常为阳性。

（2） 部分慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、传染性单核增多症、巨球蛋白血症、g-重链病、SLE、Evan综合征（ITP伴自免溶贫）可出现Coombs直接试验阳性。

（二）糖水试验

1.原理    低离子浓度的庶糖溶液在37℃温育条件下，可促进补体成分与红细胞膜的结合，使补体敏感的红细胞形成小孔，庶糖水溶液进入红细胞内引起红细胞膜破裂，发生溶血现象。

2．试剂

100g/L蔗糖溶液，38g/L枸橼酸钠溶液。

3．方法

（1）取患者枸橼酸钠抗凝血0.5ml，放于4.5ml100g/L蔗糖溶液中。

（2）混合后置37℃水浴中30分钟。

（3）低速离心，观察上清液有无溶血。

4．结果

阴性：无溶血；阳性：有溶血。

5. 质量保证

器皿必须清洁干燥，以免溶血。每次实验时作正常对照。

6.临床意义

（1） PNH患者常呈阳性，AA-PNH综合征患者亦可阳性。

（2） 部分自身免疫性溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、遗传性球形红细胞增多症患者可呈阳性。

（3） 健康人呈阴性反应。