- 讲师:刘萍萍 / 谢楠
- 课时:160h
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摘要:目的研究马尾藻多糖体外抗肿瘤作用,以期为筛选抗癌辅助药提供实验依据。方法采用热水浸提法提取马尾藻多糖,MTT法检测马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549体外增殖的影响。结果3种马尾藻多糖在体外能抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549的增殖且与浓度呈正相关;对两种肿瘤的抑制效果以围氏马尾藻最明显,其次是半叶马尾藻。结论不同马尾藻多糖抗肿瘤活性不同且对不同肿瘤的抑制作用也不同,3种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z抑制作用比对肺腺癌细胞A549抑制作用强,又以围氏马尾藻多糖抑瘤作用最强。
关键词: 马尾藻多糖; 抗肿瘤; MTT法
1 材料
1.2 细胞株鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549,均由广东医学院生物与化学教研室提供。
2 方法
2.2 MTT法检测多糖的体外抗肿瘤作用收集对数生长期的鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549,按0.5×104/孔接种于96孔板,每孔180 μl细胞悬液,在37℃、5%CO2条件下培养24 h后,实验组分别加入不同浓度的多糖溶液20 μl,使多糖的终浓度分别为0.05,0.1,0.2,0.4,0.8 mg/ml,对照组加相同体积的RPMI1640液,每组设3个平行孔,继续培养48 h后,每孔加入20 μl MTT(5 mg/ml)溶液,再培养4 h。小心弃去培养液,每孔加入100 μl DMSO溶解,待完全溶解后,于酶标免疫测定仪以570 nm测定各孔吸光度。根据下面的公式计算出抑制率,绘制浓度-抑制率曲线。
抑制率(%)=(1-处理组吸光度/对照组吸光度)×100%
3 结果
3.2 用MTT法检测3种多糖对肺腺癌细胞A549增殖的影响用不同浓度的海藻多糖处理肺腺癌细胞A549后,可见抑制率均随着多糖浓度的增加而增加;当浓度为0.8 mg/ml时,3种多糖对肺腺癌细胞A549的抑制率分别为48.0%,46.2%,51.9%,与对照组相比差异有显著性。对肺腺癌细胞A549抑制效果以围氏马尾藻最明显,其次是半叶马尾藻。结果见表2及图2。表2 MTT法检测3种多糖对A549细胞生长的影响(略)
我国海域辽阔,海藻资源丰富,大量的体内外实验充分证明海藻多糖对肿瘤有明显的抑制作用,已用于癌症的辅助治疗。据报道,硫酸化墨角藻多糖在子宫颈癌中能引起显著的细胞毒性效应从而达到治疗作用[3];硒化麒麟菜多糖具有抗人喉癌细胞株Hep-2增殖的活性,其抑制作用明显优于亚硒酸钠的抗肿瘤活性[4];Hirayasu等[5]发现海藻硫酸多糖可以通过增加淋巴细胞纤维蛋白溶酶粒酶A的酯酶活性来增强免疫反应,而抑制肿瘤生长;张志娟等[6]发现复合螺旋藻多糖与银杏叶有效成分体外联合使用能协同抑制肝癌细胞增殖。
为了筛选出经济有效的抗癌辅助药,本实验对采集于湛江硇洲岛常见且大量生长的半叶马尾藻,亨氏马尾藻和围氏马尾藻进行多糖提取,并采用MTT法检测其体外抗肿瘤的药理活性,结果证实。3种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z和肺腺癌细胞A549的生长有明显的抑制作用且与浓度呈正相关;同一类的不同马尾藻多糖抗肿瘤活性不同,从图1~2中能看出围氏马尾藻多糖抑瘤作用最强,其次是半叶马尾藻,有希望将围氏马尾藻开发成抗癌辅助药;马尾藻多糖对不同肿瘤的抑制作用也不同,从表1~2中能看出3种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z比对肺腺癌细胞A549抑制作用强,说明不同肿瘤细胞对马尾藻多糖的敏感性不同。
这3种马尾藻均为广东湛江硇洲岛海域常见藻类,且多糖的提取方法简便易行,因此,有希望将马尾藻多糖开发成一种经济、有效、低毒的抗肿瘤药物,这将有可能带来深远的经济效益和社会效益。
责编:杨盛昌
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