医药学论文：探析微生物发酵对溪黄草抑菌效果的影响

发酵法一直是中药炮制方法之一，随着科学技术的发展，发酵法应用范围更加广泛。这种方法借助微生物的作用，改变中药原有药性，提高疗效，降低毒副作用，扩大适应症［6，7］。本研究以枯草杆菌、乳酸菌和酵母菌为发酵菌种，研究发酵后的溪黄草醇提物对细菌和霉菌生长的抑制效果，为高效提取溪黄草抑菌有效成分，大规模生产高效、低毒、广谱而经济实用的食品防腐剂、抑菌药物以及对于循环利用和处理每年药厂大量废弃的药渣提供了新的途径和方法。
溪黄草购自梅州市温记百草堂，经嘉应学院生命科学学院廖富林教授鉴定为Rabdosia serra (Maxim.)Hara。美乐多购自梅州市太平洋商场。干酵母粉, 广东丹宝利酵母有限公司 。 枯草杆菌、JY-LZ乳酸芽孢杆菌、大肠杆菌、白葡萄球菌、黑曲霉、青霉菌保藏于嘉应学院生命科学学院实验室。纤维素酶（绿色木酶），酶活力>15μ/mg，上海伯奥生物科技有限公司。
2.1 工艺流程溪黄草→粉碎→称取5 g→加入水或培养基→高压灭菌(121℃，20 min)→按10%接种量接种发酵菌种→于培养箱中静止10 d→提取→测定抑菌活性。
2.2.1 种子培养基枯草杆菌种子培养基：蛋白胨1%；牛肉膏0.3%；氯化钠0.15%；pH 7.0；蒸馏水配制；121℃湿热灭菌20 min。
乳酸芽孢杆菌培养基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％ ；葡萄糖1％；磷酸氢二钾0.05%；硫酸镁0.1%；硫酸锰0.05%；pH7.0；121℃湿热灭菌20 min。
2.2.2 发酵培养基枯草杆菌发酵培养基：蛋白胨1%；葡萄糖1%；牛肉膏0.3%；氯化钠0.5%；pH7.0；蒸馏水配制；121℃湿热灭菌20 min。
乳酸芽孢杆菌培养基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％ ；葡萄糖2.5％；磷酸氢二钾0.05%；硫酸镁0.1%；硫酸锰0.05%；pH7.0；121℃湿热灭菌20 min。
美乐多乳酸菌培养基：雀巢脱脂奶粉2%；葡萄糖1%；蒸馏水配制；121℃湿热灭菌15 min。
酵母菌培养基：去皮马铃薯20%，葡萄糖2%，蒸馏水配制，121℃湿热灭菌30 min。
2.2.4 发酵培养称取5 g粉碎的溪黄草于100 ml的三角瓶内，加入30 ml蒸馏水， 121℃灭菌20 min。每瓶加入种子菌液3 ml，于适宜的温度下静止培养。同时做4种对照，即有5组实验：Ⅰ：溪黄草+水+菌；Ⅱ：溪黄草+水；Ⅲ：溪黄草+培养基+菌； Ⅳ：溪黄草+培养基；Ⅴ：培养基+菌。
发酵：将枯草杆菌系列，乳酸芽孢杆菌系列，美乐多乳酸菌系列置于(36±1)℃的恒温培养箱中静置10d，干酵母菌系列于(28±1)℃的恒温培养箱中静置10 d。
2.3 抑菌物质的提取称取5 g的溪黄草置于3角瓶中，加入30 ml 95%的乙醇，于70℃的恒温水浴锅中水浴2 h后，滤纸过滤，取滤液，将其于同温度的水浴锅中挥干浓缩至稠膏状，再加入95%的乙醇溶解并定容至10 ml。定容后放入冰箱中保藏备用。
纤维素酶处理及抑菌物质提取：分别称取纤维素酶0.010 8 g和0.031 0 g，加入含5g溪黄草和30ml蒸馏水的三角瓶中，加入后放入55℃的恒温水浴锅中，水浴2 h后取出，滤纸过滤，滤渣按上法处理。

待测样品用无菌毛细吸管吸取管长的1/3后，滴于直径为5 mm的无菌滤纸片上，每个平板上贴3片，分别做两个平行。95%乙醇作对照。
将贴了滤纸片的平板放入恒温培养箱中，静置30 min后倒置培养，大肠杆菌和白葡萄球菌培养24 h取出，黑曲霉和青霉培养48h后取出，用游标卡尺测量其抑菌圈直径。
3.1 微生物发酵对溪黄草抑制细菌生长的影响从表1可知溪黄草对白葡萄球菌的抑制作用比对大肠杆菌的抑制作用明显。表1 发酵溪黄草的抑菌效果（略）