解放军文职招聘考试种子实验手册

 种子实验手册
一、种子样品的抽取
（1）四分法
    将种子均匀地倒在光滑清洁的桌面上，略成正方形。把种子充分混拌均匀，然后将种子铺成正方形，大粒种子厚度不超过10cm，中粒种子厚度不超过5cm，小粒种子厚度不超过3cm，用分样板沿对角线将种子分成四个三角形，将对顶的两个三角形的种子装入容器中，取余下的两个对顶三角形种子两次混合，按前法继续分取，直至多于送检样品数量为止。
二、种子生物学特性测定
1、种子净度的测定
目前，净度的分析主要以手工操作为主，常用仪器为手持放大镜、筛子和吹风机等。
净度测定时，关键是准确地判断出纯净种子、废种子及夹杂物三种成分。具体方法是：将净度测定样品倒在玻璃板上或桌面上，仔细观察并区分出纯净种子、废种子及夹杂物三种成分。并分别称重，将结果记录附表。
分类的标准如下：
纯净种子：完整的、没有受伤害的、发育正常的种子；发育不完全的种子和不能识别的空粒；虽已破口或发芽，但仍具有发芽能力的种子。
带翅的种子中，凡加工时种翅容易脱落的，其纯净种子是指除去种翅的种子；凡加工时种翅不易脱落的，则不必除去，其纯净种子包括留在种子上的种翅。
壳斗科的种子应把壳斗与种子分开，把壳斗归为夹杂物。
废种子：能明显识别的空粒、腐坏粒、已萌芽因而显然丧失发芽能力的种子；严重损伤（超过原大小一半）的种子和无种皮的裸粒种子。
夹杂物：不属于纯净种子的其它树种的种子；叶片、磷片、苞片、果皮、种翅、壳斗、种子碎片、土块和其他杂质；昆虫的卵块、成虫、幼虫和蛹。
如果原测定样品重减去纯净种子、废种子及夹杂物三种成分总重量其差距不超过附表规定时，即可计算净度，否则重做。
表1  净度分析样品的总体及各个组成成分的称量精度
测定样品重，g 称量至小数位数
1.0000以下 4
1.000～9.999 3
10.00～99.99 2
100.0～999.9 1
1000或1000以上 0

表2测定净度的容许误差
测定样品 最大容许误差
5克以下 0.02
5～10 0.05
11～50 0.10
51～100 0.20
101～150 0.50
151～200 1.00
大于200 1.50

 

 

表3 两次测定的平均数容许差距
两次测定的平均数 容许差距
50%～100% <50% 
99.95～100.00 0.00～0.04 0.16
99.90～99.94 0.05～0.09 0.24
99.85～99.89 0.10～0.14 0.30
99.80～99.84 0.15～0.19 0.35
99.75～99.79 0.20～0.24 0.39
99.70～99.74 0.25～0.29 0.42
99.65～99.69 0.30～0.34 0.46
99.60～99.64 0.35～0.39 0.49
99.55～99.59 0.40～0.44 0.52
99.50～99.54 0.45～0.49 0.54
99.40～99.49 0.50～0.59 0.58
99.30～99.39 0.60～0.69 0.63
99.20～99.29 0.70～0.79 0.67
99.10～99.19 0.80～0.89 0.71
99.00～99.09 0.90～0.99 0.75
98.75～98.99 1.00～1.24 0.81
98.50～98.74 1.25～1.49 0.89
98.25～98.49 1.50～1.74 0.97
98.00～98.24 1.75～1.99 1.04
97.75～97.99 2.00～2.24 1.09
97.50～97.74 2.25～2.49 1.15
97.25～97.49 2.50～2.74 1.20
97.00～97.24 2.75～2.99 1.26
96.50～96.99~ 3.00～3.49 1.33
96.00～96.49 3.50～3.99 1.41
95.50～95.99 4.00～4.49 1.50
95.00～~95.49 4.50～4.99 1.57
94.00～94.99 5.00～5.99 1.68
93.00～93.99 6.00～6.99 1.81
92.00～92.99 7.00～7.99 1.93
91.00～91.99 8.00～8.99 2.05
90.00～90.99 9.00～9.99 2.15
88.00～89.99 10.00～11.99 2.30
86.00～87.99 12.00～13.99 2.47
84.00～~85.99 14.00～15.99 2.62
82.00～83.99 16.00～17.99 2.76
80.00～8.99 18.00～19.99 2.88
78.00～79.99 20.00～21.99 2.99
76.00～77.99 22.00～23.99 3.09
74.00～75.99 24.00～25.99 3.18
72.00～73.99 26.00～27.99 3.26
70.00～71.99 28.00～29.99 3.33
65.00～69.99 30.00～34.99 3.44
60.00～64.99 35.00～39.99 3.55
50.00～59.99 40.00～49.99 3.65

计算方法
一般进行净度的测定按下列公式计算：
净度 =纯净种子重量/（纯净种子重量+夹杂物重量+异类种子重量）                                       ×100%
2、果实解剖结构
    将风干果实浸水12h后，使用单面刀片解剖，进行解剖结构观察。另将果皮在沸水中蒸沸约45 min以促其软化；将煮沸后的果皮与未处理的种皮分别置于2.5%戊二醛中固定，经系列丙酮脱水，转入乙酸异戊酷后，进行临界点干燥，喷金，在扫描电子显微镜下观察果皮结构和种皮表皮结构特征，并进行记录和拍照。
3、果实大小的测定
    用游标卡尺分别测量果实的纵径和横径长度，其中以果实的两次垂直横径的平均值作为所测果实的横径。测定样品采用四分法抽取，每次测定数量为100粒。
4、种子形态
使用游标卡尺测量新鲜种子(即刚成熟新鲜采集的种子)的横轴、纵轴长度及种子
厚度(单位均为cm)，每组100粒，计算平均值，重复三次。
5、种子千粒重
采用四分法测量种子的千粒重，每次取种子100粒称重，重复8次。种子千粒重
(g)=(MI+MZ+…+MS)*1/8*10(注:式中MI、MZ、…、MS为每次测量的100粒种子的重量，单位为g)。
6、种子含水率检测
取净种后待测的新鲜种子200粒称重后，放入85℃烘箱烘干，第一天每隔4h取
出迅速称重，以后几天每12h称重一次，直到种子重量恒定，三个重复，取三次重复
的平均值(单位为g)计算新鲜种子含水率。
7、种子种皮透性测定
取净种后待测的新鲜种子，分为完整种子和破皮种子(夹破)两种处理，每种处理三个重复，每个重复50粒种子称重后放入室温下清水中浸泡，第一天每隔2h取出用滤纸吸干表面水分后迅速称重，以后几天每12h测定一次，直到种子吸水达到饱和，每种处理取三次重复的平均值(单位为g)计算完整种子和破皮种子的吸水速率。
8、种子生活力检测
取新鲜种子于50℃温水中浸泡48h后，纵向剖开，以不损伤胚而暴露胚为佳。再以0.5%的TTC染液在30℃的恒温箱中黑暗染色12h，检查胚和胚乳的着色情况以检测种f的生活力，设置重复3次，每重复50粒。
四唑染色法介绍：
应用2，3，5-三苯基氯化（或溴化）四唑（2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride of bromide）的无色溶液作为指示剂，这种指示剂被种子吸收，在种子组织内与活细胞的还原过程起反应，生成一种红色而稳定的不扩散物质，即三苯基甲肤（triphenyl formazan），染色的是活细胞，未染色的为死细胞。
使用氯化（或溴化）四唑的水溶液，浓度随树种而略有不同，见表中的规定。如果所使用蒸馏水的pH值不在6.5~7.5范围之内，可将四唑溶于缓冲溶液。缓冲溶液的配制方法如下：
溶液a--在1 000ml水中溶解9.078g磷酸二氢钾(KH2PO4);
溶液b--在1 000ml水中溶解11.876g磷酸氢二钠（Na2 H2PO4o2H2O），或9.472g磷酸氢二钠（Na2 H2PO4）。
取溶液a 2份和溶液b 3份混合，配成缓冲溶液。
在该缓冲溶液里溶解准确数量的四唑盐，以获得正确的浓度。例如，每100ml缓冲溶液中溶入1g四唑盐即得1%浓度的溶液。最好随配随用。剩余的溶液可在短期内贮于低温1~5℃的黑暗条件下。这种溶液可以在室温下保存几个月。
取胚：剥去外种皮和内种皮，尽量不使胚乳受到损伤，剥去种皮的种子，先放入盛有清水或垫有湿沙布的器皿中，全部剥完后再放入四唑溶液中，使溶液淹没种胚，上浮者要压沉。挑出空粒、腐坏粒和有病虫害的种粒，并计入附表中。
染色：染色时放在黑暗处，保持温度在25～30℃左右最为适宜。染色时间因树种而异，至少6小时。
观察记载：到达规定所染色的时间之后倒出溶液，用清水冲洗种胚，立即将种胚放在垫湿沙布的器皿中，保持湿润，以备鉴定。
    根据染色的部位、染色面积的大小，判断种子的生活力。并解剖种子，借助手持放大镜逐粒观察胚的染色情，记录附表中。
9、种子抑制物的分析
①抑制物提取  分别称取在33一35℃条件下干燥至恒重的果皮、果肉、外种皮、中种皮和胚乳粉末（过lmm筛粉碎机粉碎）各2.5g于研钵中，用5ml80%甲醇研磨，将研磨液分别倒入50ml试管中，再各以80%甲醇清洗研钵3次，清洗液与研磨液合并于同一试管中，最后分别以80%甲醇定容至50ml，振荡均匀。试管中的浸提液于4℃下密闭浸提24h，期间振荡4一5次。24h后取出试管，于4℃4000rpm条件下离心15min，上清液分别倒入小烧杯中，沉淀再以80%甲醇定容至50ml，搅拌并振荡充分混合，于4℃下再次浸提，操作同第一次浸提，重复三次，分别合并三次浸提液，将装有浸提液的烧杯，放在35℃的气候箱中蒸发浓缩，待甲醇挥发干净后再以蒸馏水分别定容至5Oml，即得到种子各部分萌发抑制物的浸提液原液。
②生物学鉴定  将浸提液原液分别稀释至10%、25%、50%、75%、100%，以蒸馏水为对照，在12cm直径的培养皿中放2层滤纸，分别加入5ml不同部位的、不同浓度的浸提液浸透滤纸，每皿摆放50粒白菜种子做萌发试验，各重复3次。24h、48h分别统计发芽率，72h测量苗高与根长(单位cm)。
（白菜籽置床前先在45一50℃水浴中温浸10min，不时搅拌。取白菜种子各25粒均匀摆放在滤纸中上部，培养皿放置时倾斜45“，(28士l)℃恒温黑暗培养。12h后统计发芽率(以幼根伸出长度大于种子直径为发芽标准)，72h后测量苗高和幼根长。3次重复并进行差异显著性检验）。