解放军文职招聘考试核酸原位杂交的应用

核酸原位杂交的应用

近十年来，分子生物学技术越来越广泛地用于人类疾病的研究，医院病理科档案中保存有大量的石蜡包埋组织，成为分子生物学研究材料的重要来源，在石蜡切片上进行原位杂交或原位PCR(详见原位PCR技术)是对免疫组织化学技术的重要补充和延伸。Goelz(1985)和Dubeau(1986)等成功地从石蜡包埋的组织块中提取了高质量的DNA，从而结束了DNA研究依赖于新鲜或冰冻组织和细胞的历史，并且可以广泛地应用大宗病例的回顾性研究，对病理诊断和鉴别诊断以及评估患者预后等方面均有重要价值。

石蜡包埋组织DNA提取的基本方法

脱蜡—将组织切取成10-20um的厚切片，用二甲苯脱蜡。

提取DNA—提取液中主含SDS和蛋白酶K，两者均需一定的浓度和作用时间，SDS：1-2%，蛋白酶K:200-500ug/ml,其主要作用是分离DNA与蛋白质。

在病理诊断中的应用

1、基因重排分析与淋巴瘤的诊断，淋巴瘤具有特异性抗原受体基因重排的单一性细胞增殖的特征，克隆性的免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体(TCR)基因重排的检出工作为淋巴瘤诊断的重要指标。基因重排分析在以下诊断与鉴别诊断中特别有意义：①恶性淋巴瘤与淋巴结反应性增生的鉴别。前者克隆性基因重排，后者多克隆性增生。②T细胞性淋巴瘤的诊断。③T细胞和B细胞性肿瘤的区分。④残留病变的监测和复发的早期诊断。

2、癌基因和抑癌基因的研究，癌基因的过度表达，抗癌基因的突变与丢失，均可导致肿瘤的发生与发展，并且与肿瘤的生物学行为有关，越来越多地用于肿瘤的诊断和鉴别诊断，预后的评价以及指导治疗等。例如c-erbB-2与乳腺癌，rasP21与乳腺癌和胰腺癌，P53基因的突变与多种肿瘤。

3、遗传性疾病的诊断 特别是遗传性疾病的家庭回顾性调查，遗传性疾病的基因诊断都具有重要的价值。

4、病原微生物的检验 特别是对少量病原菌及特殊病原菌(例如病毒)的检测具有重要的意义，并能将定位与定性结合起来，这也是其他方法所不能实现的。

5、组织来源的鉴定 一旦遇到标本的标记错误，通过分析DNA中的HLA-DQa位点就能很好地解决这一问题。