解放军文职招聘考试病原微生物染色法

 病原微生物染色法

在组织切片上，显示细菌最常用的染色法是Gram氏染色法，依据染色性状不同，把细菌分为两大类，Gram氏阳性细菌和Gram氏阴性细菌。

分枝杆菌有脂性被膜，用Gram氏染色法染色一般不易着色。为了显示这类杆菌，齐一尼氏石碳酸复红是最常用的经典染色方法。杆菌着色后，具有抗盐酸酒精的脱色作用，故又称抗酸性杆菌，这类细菌在病理学检验中最多见的是结核杆菌和麻疯杆菌。

结核杆菌呈单个或平行聚合排列。

麻疯杆菌与结核杆菌相似，但较短粗。

螺旋体染色目前仍使用经典的Levaditi氏组织块银染法染色。石蜡切片染色则采用Wartrin Starry氏法。

大部分霉菌虽可在HE染色切片中显示出来，但有些则需特殊染色法。如用P.A.S显示白色念球菌，新型隐球菌用Crocott-Gomori氏六胺银法。

一、Gram氏染色法

操作方法：

（1）切片常规脱蜡至水。

（2）结晶紫液中染45秒。

（3）自来水洗。

（4）Gram氏碘1分钟。

（5）在碘丙酮中分化(直到切片无色为止)。

（6）水冲洗。

（7）1%中性红染核1分钟。

（8）自来水速洗。

常规脱水、透明、封固。

结果：Gram氏阳性菌呈蓝黑色，Gram氏阴性菌呈红色。

Gram氏试剂配制。

1．结晶紫染液(Lillie氏)

95%酒精   20ml

结晶紫     2g

草酸铵     1g

蒸馏水     80ml

2．Gram氏碘液

碘结晶     1g

碘化钾     2g

蒸馏水     300ml

3．碘丙酮溶液

Lugot氏碘   2ml

丙酮       98ml

Gram氏切片染色(改良法)

操作方法：

（1）石蜡切片脱蜡常规至水。

（2）HE水溶液染色，伊红较正常深。

（3）1%结晶紫滴于切片染5-10分钟。

（4）倾去染液加Lugol氏碘液5-10分钟。

（5）倾去碘液，滤纸稍印干。

（6）苯胺二甲苯(1:1)分化至无色。

（7）二甲苯洗2次。

（8）二甲苯透明、树胶封固。

结果：Gram阳性细菌及纤维素亮蓝色，核兰色，背景淡红色。

试剂配制：

1．1%龙胆紫或甲紫、结晶紫水溶液。

2．Lugol氏碘液。

二、齐一尼氏抗酸杆菌染色法(Zienl-Neelson)

齐一尼氏抗酸杆菌染色法是一种传统的经典抗酸染色法，常用来显示结核杆菌、麻疯杆菌。由于染液的加温，可使石碳酸复红进入分枝杆菌内。再用稀酸脱去背景上的多余红色，如用苏木素来染核，杆菌鲜红色对此清晰。

操作方法：

（1）切片常规脱蜡。

（2）石碳酸复红染液滴于切片上，置酒精灯上，徐徐加温，使出现蒸气约5分钟(或在60℃下染30分钟)冷却2分钟。

（3）水洗。

（4）1%盐酸酒精分化，切片呈淡桃红色为止(在显微镜下控制)。

（5）流水洗。

（6）苏木素或0.5%次甲蓝水溶液染核。

（7）常规脱水、透明、封固。

结果：抗酸菌红色，核蓝色。

试剂配制：

Ziehl-Neelsony氏石碳酸复染液。

碱性品红酒精饱和液(约5.95%)   10ml

5%石碳酸水溶液             90ml