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［摘要］目的探讨体外 ATP 法化疗药物敏感试验在乳腺癌细胞中的可行性。方法以 ATP-TCA 法，检测 37 例乳腺癌患者的癌细胞对 6 种常用化疗药物的敏感性。结果 ATPTCA 法的可评估率为 91.89%；6 种试验用化疗药物的敏感率分别为：足叶乙甙 14.71%， 紫杉醇 20.59%，丝裂霉素 32.35%，5-氟尿嘧啶 47.06%，草酸铂 58.82%，表阿霉素 67.65%。结论 ATP-TCA 肿瘤细胞化疗药敏试验可作为乳腺癌患者个体化疗中化疗药物敏 感性的预测。 ［关键词］ATP-TCA 法；乳腺癌；化疗药物 ApplicationofATPbioluminescenceassayforscreeningchemotherapeuticagentsofbreabioluminescenceassayforscreeningchemotherapeuticagentsofbrea sttumor ［Abstract］ObjectiveTostudytheapplicationoftheexvivoATPbioluminescenceassayforscreeningchemotherapeuticagentsofbreabioluminescenceassay( ATPTCA)inthechemotherapyofbreasttumor.MethodsThesurgicalspecimensof37patientswerete stedbytheATPTCA.ResultsEvaluabletestresultswereachievedin34of37patients，theevaluabilityratewas9 1.89%.Thesensitiveratesofetoposid(Vp-16)，paclitaxel(TXL)，mitomycin(MMC)，5fluoruracil(5FU)，oxaliplati(OXA)，epirubicin(EPI)was14.71%，20.59%，32.35%，47.06%，58.82 %，67.65%，respectively.ConclusionATPbioluminescenceassayforscreeningchemotherapeuticagentsofbreabioluminescenceassayisagoodoptionintheche motherapeuticagentsscreeningofbreasttumors. ［Keywords］ATPbioluminescenceassayforscreeningchemotherapeuticagentsofbreabioluminescence；breasttumor；chemotherapydrug 选择针对个体有效的药物进行化疗是治疗乳腺癌的重要手段之一。由于同一化疗方案 对不同个体的类同肿瘤的疗效存在差异，化疗前对药物进行体外敏感试验，预测出有效的 单药或有效（或敏感）联合药物组成的化疗方案，是提高化疗药物疗效的潜在方法之一。 ATP-TCA 法（三磷酸腺苷-肿瘤细胞药敏试验）是近年发展起来的敏感而稳定的药敏检测 方法［1］。本文应用 ATP-TCA 法对 37 例乳腺癌患者的乳腺癌细胞进行 6 种化疗药物的 药敏试验，以探讨 ATP-TCA 法用于乳腺癌患者体外化疗药物检测在方法学方面的可靠性。 1 材料与方法 1.1 一般资料收集 2003 年 3 月～2005 年 5 月在本院手术治疗的乳腺癌（经病理确诊） 患者 37 例标 本。37 例患者最小年龄 25 岁，最大年龄 65 岁。 1.2 材料 ATP-TCA 试剂盒（包括改良 PRMI-1640 培养基）由北京金紫晶生物技术有 限公司提供。MPL-1 型自发光分析仪为德国 Berthold 公司产品。化疗药物：5-氟尿嘧啶 （5-FU，南通制药总厂），表阿霉素（EPI，浙江海政制药），足叶乙甙（VP-16，江苏 恒瑞），紫杉醇（TXL，澳大利亚 FH 科贸有限公司），丝裂霉素（MMC，日本明治药 厂），草酸铂（OXA，法国 SanofiWinthrop 公司）。 1.3 方法 ATP-TCA 操作步骤（按试剂盒使用说明操作）：取肿瘤组织标本，在无菌条 件下，剥离肿瘤组织的纤维、脂肪及结缔组织，然后用剪刀将肿瘤组织尽可能剪成小碎块， 过 200 目钢网后放入肿瘤组织解离酶液中，置 37℃、5%CO2、95%湿度下孵育 1.5～ 3h。在室温下，以 1500r/mim 条件下离心 20min，弃上清液，用 Hanks 洗 2 次，以 PRMI1640 制成癌细胞悬液，取 35μll 用台盼蓝染色，显微镜下计数，并观察细胞活性。调整细 胞浓度至 20～40 万/ml，以每孔 0.1ml 接种至 96 孔培养板内。按 400%、200%、100%、50%、25%和 12.5%的血浆峰值浓度，将药物加入培养孔每孔 0.1ml，每个浓度 3 个平行孔，并设最大抑制（MI）和无药物（MO）对照孔，于 5%CO2、37℃、95%湿度下孵育 6～7 天。加入肿瘤细胞 ATP 提取液 0.1ml，混匀后室温 下 15min，取 0.05ml 混合液置微板荧光分析仪检测。 1.4ATP-TCA 结果评估 1.4.1 应用 ATP-TCA 的条件(1)检测的标本必须经细胞学和病理学证实为恶性肿瘤，且 混悬液中肿瘤细胞数>20%。(2)培养板 MO 对照行必须可观察。(3)药物活性的剂量反应曲 线须可观察。(4)平行孔间 CV 值<20%。 1.4.2ATP-TCA 药物敏感和耐药的解读(1)药物敏感定义：高 AUC（抑制曲线下面积） 值，低 IC90（抑制 90%癌细胞生长时的药物浓度）、IC50（抑制半数癌细胞生长时的药 物浓度）和 SI（敏感指数）值，和高 TGI（癌细胞生长抑制）值（表示癌细胞生存 100% 抑制）。(2)药物耐受定义：低 AUC 值，高 IC90、IC50 和 SI 值和低 TGI 值（特别是在高 测试浓度和弱剂量反应时）。(3)敏感度分级，定义为：强敏感：IC90≤100%TDC（测试肿 瘤药物浓度）和 IC50≤25%TDC。部分敏感：IC90＞100%TDC 和 IC50≤25%TDC。弱敏 感：IC90≤100%TDC 和 IC50＞25%TDC。耐药：IC90>100%TDC 和 IC50≤25%TDC。 2 结果 在收集的 37 例患者中，34 例具有评估性，总可评估率为 91.89%，乳腺癌 ATP-TCA 试验药物剂量效应曲线图（见图 1）。 ATP-TCA 试验结果显示不同个体的乳腺癌细胞对 6 种化疗药物具有不同的敏感性。在 所测试的化疗药物中，它们的敏感率排序如下：表阿霉素（EPI）67.65%，草酸铂 （OXA）58.82%，5-氟尿嘧啶（5-FU）47.05%，丝裂霉素（MMC）32.35%，紫杉醇 （TXL）20.59%，足叶乙甙（VP-16）14.71%。其中表阿霉素的敏感率最高，足叶乙甙的 敏感率最低（见表 1）。 3 讨论 在本研究中，应用对乳腺癌有较高评估率的 ATP-TCA 法［2］，对 37 例乳腺癌患者 的癌细胞进行体外化疗药物敏感性检测方法学的再研究。ATP 是活细胞的基本能量单位， 当细胞的代谢受损时，ATP 合成水平下降，其与活细胞数量呈正相关，故通过测定 ATP 水 平可反映生物体的增殖活性。ATP 体外药敏试验的原理是细胞内 ATP 与荧光素-荧光素酶 复合物作用产生可测定荧光（波长 562nm），检测荧光值计算出 ATP 量可反映活细胞数。 Sevin 等研究认为乳腺癌手术后组织的可评估率为 97%，敏感性为 90%，特异性为 86%， 其临床符合率为 70%～80%［2］。本组实验结果较之为低，这可能与我们的操作不够熟 练、培养过程真菌污染及试验用药有关。乳腺癌被认为是一种全身性疾病，对化疗中度敏 感，Rein 等［3］用 ATP-TCA 法测试晚期乳腺癌体外对蒽环类抗生素、肽素类和铂类的敏 感性，同时用免疫组化法检测 P53、bcl-2 的表达，发现体外反应率最高为 66.7%，提示化 疗反应和凋亡无关及 P53、bcl-2 的表达与体外药敏结果无关。我们应用北京金紫晶生物技 术有限公司提供的 ATP-TCA 试剂盒，体会到 ATP-TCA 法有如下优点：（1）成功率及重 复性高，达 97%；（2）细胞用量少（1.5～2.5）×1011/L；（3）采用荧光检测范围较大， 且可定量；（4）药物浓度呈线性范围，有 6 个细胞级数，判断趋势明显；（5）干扰因素 少；（6）改良的 RMPI-1640 培养基可选择性地促进肿瘤细胞生长，并抑制纤维细胞和血 细胞的生长［4］。研究表明，ATP-TCA 法用于体外乳腺癌患者的癌细胞化疗药物检测在 方法学上是可靠的［5］。因本研究样本有限，涉及临床因素不多，药敏试验结果与临床 疗效一致性有待进一步的研究。