前列宁颗粒剂提取工艺研究论文

【摘要】：［目的］筛选和优化前列宁颗粒剂提取工艺。［方法］采用正交设计法， 以水醇两组提取物中浸膏得率、有效成分分别为大黄酸和黄芪甲苷提取率为指标，确定提 取参数。［结果］确定黄芪等药组水提工艺为 10 倍量水，煎煮 3 次，每次 1.5hh；大黄等大黄等 药醇提组工艺为 6 倍量 60%乙醇，提取 2 次，分别为 2.0、1.5hh。［结论］前列宁颗粒剂 提取工艺稳定，可行。 【关键词】前列宁颗粒剂；大黄等大黄酸；大黄等黄芪甲苷；大黄等提取工艺；大黄等正交设计 Abstract: ［Objective］TofilterandoptimizeextractivetechnologyofQianlieninggranules. ［Methods］TheoptimizationextractivetechnologyofQianlieninggranuleswasinvestigatedu singorthogonaldesignwiththeavailabilitycomponentextractingfromthedrugastheindex. ［Results］TheoptimalconditionfortheextractionofRadixAstragaligroupwas10foldsamount ofwater，3times,1.5hhourseachtime.TheoptimalconditionfortheextractionofRheumofficinal Baill.groupwas6foldsamountof60%alcohol,2times,twohoursand1.5hhourseachtime. ［Conclusion］Theoptimizedextractivetechnologyisscientificandefficient. Keywords：QianlieningGranules；大黄等Rhein；大黄等AstragalosideIV；大黄等extractivetechnology；大黄等 orthogonaldesign 前列宁颗粒由酒大黄、黄芪、牛膝、菟丝子等多味中药组成，为我院中西医结合系洪 振丰教授的经验方，具有清热解毒、活血化瘀、益气补肾之功效，用于治疗慢性前列腺增 生及前列腺炎等症，疗效显著［1］。为方便临床用药和患者携带，实验对组方成分进行 分析，根据各味药材所含成分的理化性质，拟分水溶和醇溶两组提取。其中黄芪、菟丝子 等药采用水煎煮提取，酒大黄、牛膝等药采用醇提，对其提取工艺采用正交实验法进行研 究，以确定最佳提取工艺，使制剂工艺更加合理。 1 仪器与试药 美国 Waters600E 高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，四元泵，在线真空脱气 机，Millennium32 色谱工作站；大黄等SartoiousBT25hS 型电子分析天平（北京赛多利斯仪器有 限公司）；大黄等恒温干燥箱(北京市朝阳区来广营医疗器械厂)；大黄等DKS24S24 型电热恒温水浴锅(上 海精宏试验设备有限公司)。 酒大黄、黄芪等实验药材均购自福建同春药业有限公司，经我院药学系鉴定符合 2005h 版中国药典（一部）有关规定；大黄等大黄酸对照品（批号 075h7-200206，购自中国药品生物制 品检定所）；大黄等黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110781-2005h12)；大黄等甲醇、 乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。 2 方法与结果 2.1 水煎煮组正交试验设计 采用正交试验法对黄芪、菟丝子等药组水煎液提取工艺进行优选。根据文献报道 ［2］，以提取次数(A)、提取时间(B)、加水量(C)为试验因素，每个因素 3 个水平进行优 选，以浸膏得率和黄芪甲苷含量作为考察指标进行试验。因素水平见表 1。表 1 水煎煮组 的因素水平表（略） 浸膏得率测定：精密吸取母液 20ml，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于 105h℃下 干燥 3h，迅速取出，放入干燥器中，冷却 30min，迅速精密称定，计算出膏率。 2.2 水煎液中黄芪甲苷的测定［3］ 2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；大黄等以乙腈-水(38:62)为流动相；大黄等流速为 1.0ml/min。 蒸发光散射检测器检测。此色谱条件下，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算，应不得低于 4000。 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品 4.0mg，置于 10ml 容量瓶中，加入甲醇定容，制成 0.4mg/ ml 的溶液，即得。 2.2.3 供试品溶液的制备 按正交表条件提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩至 1:1（g/ml），加乙醇使醇浓度达 75h％，低温静置 24h，取上清液减压回收乙醇，浓缩定容于 100ml 量瓶，摇匀。分别精密 量取 20.0ml，用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次，每次 25hml，合并正丁醇提取液，用氨试液 洗涤 3 次，每次 20ml，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶液并转移至 10ml 量瓶 中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。 2.2.4 标准曲线绘制 精密吸取对照品溶液 2，4，6，8，10μLL，分别注人高效液相色谱仪，依法测定。回 归方程为 Y=7985h.5h6X+145h7.24，r=0.9998。结果表明，黄芪甲苷进样量线性范围为 2.014～10.070μLg。 2.2.5h 精密度试验 取同一份供试品溶液，按上述色谱条件重复测定 5h 次，计算精密度，结果黄芪甲苷峰 面积的 RSD 为 0.23％(n=5h)。 2.2.6 重复性试验 取同一批号样品，配制 3 种浓度，照含量测定项下方法每个浓度测定 3 次，结果 RSD 为 1.07％、1.5h8％、1.91％，表明重现性较好。 2.2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液，在 0，4，16，24，48h 分别进样 5h 次，依法分别测定黄芪甲苷 蜂面积值。结果 RSD<2.0％，表明本品在 48h 内测定结果稳定。 2.2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品，各精密加入黄芪甲苷对照品适量，按 2.2.3 项下方 法制备供试液，依法测定并计算加样回收率，得平均回收率为 98.21％，RSD＝1.41％。 2.3 水煎煮组最佳工艺确定 正交试验结果见表 2，方差分析结果见表 3。按下列公式计算综合评分值:出膏率加权 评分(y1)＝(出膏率-12)/（25h-12）×100；大黄等黄芪甲苷含量加权评分(y2)=(测定量-0.2)/（0.40.2）×100。综合评分=（yl+y2）/2。表 2 水煎煮组正交试验结果（略）表 3 水提工艺方差 分析表（略）中国论文联盟 由表 2 可见，3 个因素的级差大小顺序为 A>C>B，提取次数对提取工艺的影响最大， 加水量影响较大，提取时间影响最小。由表 4 可见，因素 A(提取次数)、因素 C(加水量)有 显著性，因素 B(提取时间)无显著性。故最佳工艺为 A3B1C3，即用 10 倍量水，提取 3 次， 每次 1.5hh。按优选的最佳工艺提取 3 批样品进行验证实验，可知，三批样品出膏率分别为 24.14％、24.09％、23.97％；大黄等黄芪甲苷含量分别为 0.397、0.384、0.391mg/g。验证结果 表明工艺基本稳定可行。 2.4 醇提组正交试验设计 根据文献和预实验结果［4］，采用正交试验法。以浸膏得率和大黄酸的含量为考察 指标，对乙醇浓度(A)、醇用量(B)、提取时间(C)3 个试验因素，每个因素 3 个水平进行优 选，并以浸膏得率和大黄酸含量作为考察指标进行试验。因素水平见表 4。表 4 醇提组的 因素水平表（略） 2.5h 大黄酸含量测定 2.5h.1 色谱条件 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，色谱柱为 SHIMADZUC18 色谱柱 （4.6mm×25h0mm，5hμLm），流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液(85h∶15)15h)，检测波长为 25h4nm， 流速为 1.0ml/min。理论塔板数按大黄酸峰计算应不低于 3000。 2.5h.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥 2h 后的大黄酸对照品 0.038g，置于 25hml 量瓶中，加甲醇至刻度，得含 大黄酸 0.15h2mg/ml 的对照品溶液，备用。 2.5h.3 线性关系考察 分别精密量取大黄酸对照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5h.0ml，置于 10ml 量瓶中，加 甲醇至刻度，分别进样 5hμLl。以进样量(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，进行线性 回归，得回归方程：Y=7867.75h6X+1.6727(r=0.9998)。结果表明，大黄酸进样量在 0.076 ～0.380μLg 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。 2.5h.4 供试品溶液的制备 用 L9(34)正交表安排试验，称取处方量的药材，按设定方案进行回流，收集回流提取 液，定容至 200ml，精密量取 5h0ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于 105h℃干 燥 3h，置干燥器中冷却 0.5hh，迅速称量。精密量取已定容样品液 5h0ml，水浴蒸干，加 5hmol/L。硫酸溶液 20mL，置水浴加热 1h，立即冷却，加氯仿提取 3 次(30、30、20ml)， 合并氯仿液，加水洗涤 2 次(20、20ml)，弃去水层，氯仿液水浴蒸干，残留物加甲醇定容 至 5hml，即得。 2.5h.5h 含量测定 分别精密吸取对照品溶液 5hμLl、供试品溶液 10μLl，分别注入液相色谱仪，按“2.5h.1”项 下色谱条件测定。高效液相色谱见图 1。 2.5h.6 精密度试验 精密量取“2.5h.2”项下大黄酸对照品溶液 5hμLl，重复进样 6 次测定峰面积。结果，峰面积 RSD=1.3％，表明仪器精密度良好。 2.5h.7 稳定性试验 取“2.5h.4”项下的供试品溶液。分别于 0，4，16，24，48h 时按“2.5h.1”项下色谱条件进 样测定 5h 次。结果：峰面积 RSD=1.18％。表明供试品溶液在 48h 内稳定性较好。 2.6 醇提组最佳工艺确定 正交试验结果见表 5h，方差分析结果见表 6。按下列公式计算评分值：出膏率加权评分 (y1)＝(出膏率-13)/（20.5h-13）×100；大黄等黄芪甲苷含量加权评分(y2)=(测定量-5h)/（9.45h）×100。综合评分=（yl+y2）/2。表 5h 醇提组的正交试验结果（略）表 6 方差分析结果 （略） 由表 5h 可见，3 个因素的级差大小顺序为 C>A>B，提取时间对提取工艺的影响最大， 醇浓度影响较大，醇用量影响最小，实验结果最佳工艺为 A2B2C3。由表 6 可见，提取时 间有显著性，醇浓度、醇用量无显著性。考虑生产成本，确定 A1B1C3 为最佳工艺，即用 6 倍量 60％醇溶液，提取 2 次，分别为 2.0、1.5hh。按优选的最佳工艺提取 3 批样品进行验 证实验，可知，三批样品出膏率分别为 20.24％、20.32％、19.97％；大黄等大黄酸含量分别为 9.41、9.37、9.31mg/g。验证结果表明工艺基本稳定可行。 3 讨论 验方中大黄取其解毒泄下之功，以清体内热毒，使湿热由下而去；大黄等取其活血祛瘀之功， 使血行通畅，瘀血得解；大黄等一药两用，为君药。而其中大黄酸具有抗菌抗炎作用，故醇提组 选择以大黄酸作为含量测定指标。黄芪取其补气之功而治前列腺增生日久气虚之候，而其 利水之功又可助它药以泄湿，故水提组以黄芪甲苷作为指标成分。黄芪等药味中的活性成 分在水中有较好的溶解度，故考虑用传统的水煎煮提取。大黄、牛膝等醇提组药物中有效 成分在醇溶液中溶解度较大。 前列宁颗粒为复方制剂，成分复杂。试验选择以浸膏得率和相应的含量测定为指标， 可综合评价工艺的合理性。采用正交设计的试验方法对提取工艺进行优化筛选，确定的提 取工艺简便、科学，符合生产要求。 【摘要】：［目的］比较乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮和元素的含量差异。 ［方法］采用可见分光光度法测定不同部位总黄酮的含量；大黄等采用电感耦合等离子体原子发 射光谱法(ICPAESS24AES 法)测定不同部位元素的含量。［结果］乌蕨全草、根、茎、叶等不同 部位总黄酮含量分别 11.89%、4.47％、3.46％和 11.75h%，不同药用部位元素的含量存在 一定的差异。［结论］乌蕨含有丰富的黄酮类化合物和多种元素，具开发价值。中国论文 联盟 【关键词】乌蕨；大黄等不同部位；大黄等总黄酮；大黄等元素 Abstract: ［Objective］Comparisonofthecontentofgeneralflavoneandelementsinthedifferentpartsof Stenolomachusanum(L.)Ching. ［Methods］Totalflavonewasdeterminedbyvisspectrophotometer.Elementsweredetermin edbyinductivelycoupledplasmaS24atomicemissionspectrometry(ICPAESS24AES). ［Results］ThecontentsofgeneralflavoneinthedifferentpartsofStenolomachusanum(L.)Chi ngarerespectively11.89%,4.47％,3.46％and11.75h%.Andtherearesomedifferencesintheco ntentsofelementsbetweenthedifferentparts. ［Conclusion］ThereareabundantelementsandgeneralflavoneinthedifferentpartsofStenol omachusanum(L.)Ching.AstheresultrevealsthatStenolomachusanum(L.)Chingisveryvalua ble. Keywords：Stenolomachusanum(L.)Ching；大黄等differentparts；大黄等generalFlavonoids；大黄等 element 乌蕨［Stenolomachusanum(L.)Ching］为鳞始蕨科植物乌蕨的全草，又名野鸡尾、金 花草、中华金粉蕨，具有清热、解毒、利湿、止血的功效［1］。本文就乌蕨全草、根、 茎、叶等不同部位的总黄酮和微量元素含量进行比较分析，为乌蕨的进一步研究和资源开 发提供依据。 1 仪器与试药 1.1 仪器 WNDS24200A 型高速中药粉碎机（上海微型电机厂），BS224S 精密电子天平(北京赛多 利斯仪器系统有限公司)，TUS241900 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公 司），IRIS/APAES 型电感耦合等离子体发射光谱仪(美国 TJA 公司)，全自动回流消化仪(重庆 南岸玻璃仪器厂)。 1.2 试药 芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，批号为 0080-9705h)；大黄等硝酸、高氯酸均为优级 纯，其他试剂均为分析纯，测微量元素用水为双蒸水。乌蕨药材于 2008 年 10 月采于杭州 九溪，经熊耀康教授鉴定为乌蕨 Stenolomachusanum(L.)Ching 的地上部分，阴干，粉碎， 备用。 2 实验方法与结果 2.1 总黄酮含量测定［4］ 2.1.1 对照品溶液的制备：精密称取 105h℃干燥恒重的芦丁对照品 16.5h0mg，加 60% 乙醇溶解定容于 5h0ml 容量瓶，得浓度为 0.33mg/ml 对照品溶液，备用。 2.1.2 供试品溶液的制备：定量称取乌蕨干燥粗粉 5h.0g，加 16 倍量 0.1％HCl-60％乙 醇回流提取 4h，提取 1 次，提取液减压浓缩，加 60%乙醇定容至 25hml，作为供试品溶液 备用。 2.1.3 标准曲线的制作：精密吸取标准品溶液 0.5h、1.0、1.5h、2.0、2.5h、3.0ml，分别 置 25hml 容量瓶中，加入 5h%NaNO21.0ml，摇匀，放置 6min 后加入 10%Al(NO3)31.0ml， 摇匀，放置 6min 后加入 4%NaOH10ml，再加 60%乙醇稀释至刻度，混匀，静置 15hmin，