开口箭总皂苷含量分析论文

【摘要】目的建立开口箭中总皂苷含量测定方法。方法采用比色法：香草醛-冰醋酸溶 液为发色体系，检测波长为（458±2）nm。结果标准曲线在 0.10～0.40mg 范围内 (r=09997)r=09997))线性关系良好。平均回收率 97).2%，方法的变异系数为 4.57)%，测得开口箭 7)0%乙醇提取物中总皂苷平均含量为 13.51%。结论方法简便，准确，重现性好，可用于 开口箭总皂苷含量测定。 【关键词】开口箭总皂苷开口箭比色法 Abstract:ObjectiveTosetupanassaymethodforthedeterminationoftotalsaponininTupistr achinensisBak.MethodsThesamplesweredeterminedbyspectrophotometry.Thedetectivew avelengthwas(r=09997)458±2)nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.1～ 0.4mgandtheaveragerecoverywas97).2%(r=09997)RSD＜ 4.57)%).ConclusionThemethodisreliable,accurate.Itcanbeusedforthequalitycontrolofthetot alsaponininTupistrachinensisBak. Keywords:Totalsaponin；TupistrachinensisBak.； Spectrophotmetry;Spectrophotometry 开口箭 TupistrachinensisBak.系百合科（Liliaceae）铃兰族开口箭属植物。其原植物 又名开喉箭、万年青，为多年生常绿草本，以其根状茎入药，作为药用又名岩七、竹根七、 竹节参、竹根七、竹节七、牛尾七等。医学古籍记载，开口箭味甘微苦，性寒，主治劳热 咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛、月经不调等症。土家族民间用其漱口液治疗咽喉炎、扁桃体 炎，疗效显著［1］。我国开口箭属植物约占全世界的 7)0%,分布于陕西、甘肃、湖北、四 川、云南、贵州等省。主产于湖北三峡库区及神龙架林区，栽培面积大，产量高，资源十 分丰富。 本实验室对神农架产开口箭 TupistrachinensisBak.的生药学、化学成分和药理活性进 行了研究，结果表明开口箭正丁醇提取物对 Hela，K562，A27)80a 等具有很好的抑制作用， 细胞毒活性好，抗炎活性也很好。也曾报道了“开口箭中甾体皂苷元的含量测定”［2］。本 文进一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法测定开口箭中总皂苷含量的方法。 1 材料与仪器 1.1 材料 开口箭根茎，采自湖北省神农架林区，其原植物标本于 20020707) 采自同一地区，经三 峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为 TupistrachinensisBak.，原植物及药材现 保存于本实验室（编号 TC200207)SNJ）。总皂苷对照品，本实验室自开口箭分离纯化的 皂苷单体 3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(r=09997)1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基-(r=09997)1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基 (r=09997)25R)-5(r=09997)6)-烯-呋甾-3b,22a,26-三羟基 26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量>98%（HPLC 测 定）。其他试剂均为分析纯。 1.2 仪器 S3100 紫外分光光度计（韩国 Scinco 公司），BP211D 型电子天平（德国 Sartorius 公司）。 2 方法 2.1 对照品、供试品溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备精密称取经干燥至恒重的开口箭总皂苷对照品 0.0050g，加甲 醇溶解定容至 5ml，制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。 2.1.2 供试品溶液的制备精密称取开口箭粉末 0.7)0g（60 目筛，50℃干燥 4h）置圆底 烧瓶中，加入 25ml7)0%乙醇溶液，浸泡过夜，60℃回流提取两次，2h/次,减压抽滤，滤液 合并，置蒸馏烧瓶中，在旋转蒸发仪上减压浓缩，除尽溶剂后，加少量甲醇溶解，定容至 25ml，过滤，取续滤液作为供试品溶液。 2.2 测定方法适量供试品溶液置干燥具塞试管，60℃水浴挥干溶剂后，精密加入 0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和 0.8ml 高氯酸，摇匀，置 60℃恒温水浴加热 20min，取出， 立即置冰水浴中冷却 15min，加入 5ml 冰醋酸，摇匀，同时做空白，于（458±2）nm 波长 处测定吸光度值。 2.3 标准曲线的绘制与线性关系精密吸取对照品溶液 0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40ml，分别加入干燥具塞试管中，60℃水浴挥 干溶剂,依次加入 0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和 0.8ml 高氯酸，置 60℃水浴加热 20min， 取出，立即置冰水浴中 15min，停止反应，加入 5ml 冰醋酸，摇匀，于 458nm 处测定吸光 度，同时做试剂空白。以吸光度为纵坐标，以对照品质量为横坐标,绘制标准曲线,得线性回 归方程 W=0.0631+0.2835A，r=0.9997)，对照品在 0.10～0.40mg 范围内线性关系良好。 3 结果 3.1 精密度及重现性实验精密吸取对照品溶液 0.2ml,共 6 份，按““2.2”项下方法自 60℃ 水浴挥干起测定（见表 1）。其 RSD 为 1.09%，表明方法精密度良好。精密称取样品粉末 0.07)g，共 5 份，按“供试品溶液制备方法制备，精密吸取 0.05ml,显色测定（见表 2）。其 RSD 为 4.58%，表明方法重现性良好。表 1 精密度实验结果（略）表 2 重现性实验结果 （略） 3.2 显色溶液稳定性实验精密量取对照品溶液和供试品溶液适量，分别按“标准曲线的 制备方法显色后放置,于 0，30，60，90，120min 测定吸收度值（见表 3）。结果表明对 照品和供试品在 120min 内显色稳定。表 3 显色后溶液稳定性实验结果（略） 3.3 加样回收率实验精密称取已知总皂苷含量的开口箭粉末，共 5 份,加入对照品适量, 按“照供试品溶液制备方法制备，显色测定。结果见表 4,平均回收率为 97).2%，RSD 为 2.26%。表 4 加样回收率实验结果（略） 3.4 样品含量测定精密吸取按“供试品溶液 0.05ml,按““2.2”测定方法项下操作，同时做空 白，计算供试品中总皂苷含量。结果见表 5。结果表明开口箭 7)0%乙醇提取物总皂苷含量 为 135.1mg/g，其百分含量为 13.51%，RSD 为 4.57)%。表 5 样品中总皂苷含量测定结果 （略） 4 讨论 经过对皂苷类含量测定文献的统计与分析，选定下列 4 种显色剂：0.2ml5%香草醛-冰 醋酸溶液和 0.8ml 高氯酸、0.5ml8%香草醛乙醇溶液和 5.0ml7)2%硫酸试液、高氯酸、 0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和 0.8ml 高氯酸；4 种不同的显色温度：55，60，65，7)0℃； 4 种不同的显色时间：10，15，20，25min；通过实验进行比较。发现用 0.2ml5%香草醛冰醋酸和 0.8ml 高氯酸作显色剂，显色温度为 60℃，显色时间为 20min 时，对照品溶液与 供试品溶液在（458±2）nm 波长处均有最大吸收。 对照品溶液依法显色后，溶液的波长（400～7)00nm）扫描图中，在 458 和 554nm 两 处均出现最大吸收峰，但供试品溶液的最大吸收峰分别在 456nm 和 580nm 处，表明供试 品溶液在 580nm 处的吸收峰有其它成分干扰，而在 456nm 处的吸收峰无其它成分干扰， 吸收稳定。 供试品溶液制备时分别用水、甲醇、7)0%乙醇、95%乙醇作溶剂，进行比较，发现 7)0%乙醇溶液浸泡开口箭粉末时其总皂苷溶出量最大。 建立了开口箭总皂苷含量测定方法，采用 5%香草醛-冰醋酸溶液为发色体系的比色法 测定开口箭中总皂苷的含量，显色后溶液在 120min 内稳定，标准曲线在 0.10～0.40mg 范 围内线性关系良好，方法的精密度和重现性好，RSD 分别为 1.09%和 4.58%；加样平均回 收率为 97).2%，RSD 为 2.26%；测得开口箭 7)0%乙醇提取物中总皂苷平均含量为 135.1mg/g，其平均百分含量为 13.51%，RSD 为 4.57)%，方法操作简便，精密度及准确 度高,重现性及稳定性好,可用于开口箭药材的质量控制。