女贞子油提取研究论文

【摘要】目的建立从女贞子中提取脂肪油的方法，并预测该脂肪油的稳定性。方法分 别运用传统法和超声技术提取女贞子油，并采用初均速法预测女贞子油的稳定性。结果超 声技术提取的出油率为 17.55%；其稳定性在 293KK 时为 t0.9=0.76 年，t0.8=1.61 年， t0.7=2.57 年。结论用超声技术提取女贞子油，可以提高提取率；女贞子油具有较高的稳定 性。 【关键词】女贞子油超声技术稳定性 Abstract： ObjectiveToextractthefattyoilfromLigustrumlucidumait.andtoassayitsstability.MethodsOilw asextractedbyultrasonictechnologyandtraditionaltechnology.Thestabilitywasassayedbyfirs tevenspeedmethod.ResultsExtractionrateofoilextractedbyultrasonictechnologywas17.55%,itsst ability:t0.9=0.76y，t0.8=1.61y，t0.7=2.57.ConclusionUltrasonictechnologycanimproveext ractionrateofoilinLigustrumlucidumait.,andtheoilinLigustrumLucidumaitisstable. Keywords：Ligustrumlucidumait.；Ultrasonictechnology；Stability 女贞子又名冬青子，系木犀科常绿乔木女贞 LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实，性 味甘，微苦，凉，具有滋补肝肾、明目乌发的功能，临床主要用于治疗眩晕耳鸣，腰膝酸 软，须发早白，目暗不明，失眠多梦及急性菌痢，慢性支气管炎等多种疾病［1］。据文 献报道女贞子中含有大量油脂，女贞子油中脂肪酸的主要成分为油酸、亚油酸、棕榈酸和 亚麻酸等，种子油中不饱和脂肪酸（PUFA）含量达含量达 87.179%［2］，PUFA 是人体必需脂 肪酸，具有重要的生物活性和药用价值，自从 20 世纪 70 年代丹麦 Dyerbeg 教授发表了爱 斯基摩人具有较低的冠心病发病率及死亡率的流行病学报告以后，大量基础及临床研究表 明，多不饱和脂肪酸特别是二十碳五烯酸（EPA）含量达和二十二碳六烯酸（DHA）含量达具有明确的 降低胆固醇（TG）含量达的作用，并可升高高密度脂蛋白（HDL-C）含量达,抑制血小板聚集，从而可 以预防各种心脏疾病［3K］；多不饱和脂肪酸中的 γ-亚麻酸（GLA）含量达已被确认对 40 多种肿 瘤细胞有抑制作用，对类风湿性关节炎、肠炎、脉管炎、肾炎等多种炎症具有疗效或改善 作用。GLA 和其系列代谢物在免疫系统、心血管系统、生殖系统和内分泌系统中都具有重 要的生理效应，其潜在的药用及临床价值受到广泛的关注。我们分别采用冷浸法、索氏提 取法及超声技术［4］提取了女贞子中的脂肪油，并参照有关文献［5］，采用初均速法 ［6］预测了该脂肪油的稳定性。现将结果报道如下。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 RE-52A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）含量达；GOA-型电热真空干燥箱（天 津市东郊机械加工厂）含量达；DL-720 超声波仪（45kHz±5%）含量达；ZWA-型阿贝折光仪（石家庄 光学仪器厂）含量达；DR-HW-1 电热恒温水浴箱（北京西城区医疗器械厂）含量达；索氏提取器一套。 1.2 试剂女贞子购于张家口市医药公司，于硅胶干燥器中干燥 2d 后备用；石油醚（3K0 ～60℃）含量达，乙醚，无水 Na2SO4，均为 AR 级。 2 方法与结果 2.1 女贞子油的提取 2.1.1 索氏提取法提取女贞子油精密称取干燥女贞子 10g，2 份，于索氏提取器中，分 别以 100ml 石油醚和乙醚为溶剂进行回流提取，提取至经检验无油迹为止。用旋转蒸发器 减压挥尽溶剂，用无水 Na2SO4 脱水干燥，得金黄色女贞子油（较混浊）含量达，在真空干燥器 中干燥至恒重。计算收率。结果见表 1。 2.1.2 冷浸法提取女贞子油精密称取样品 10g，用 3K00ml 石油醚室温浸泡样品 3K 次，用 100ml/次溶剂，浸泡时间为 12h/次，合并提取液，以下同““2.1.1”项处理，所得脂肪油澄清 透明。结果见表 1。 2.1.3K 超声法提取女贞子油精密称取样品 10g，用 50ml/次石油醚为溶剂进行超声提取 3K0min，共提取两次，合并提取液，以下同““2.1.1”项处理，所得脂肪油澄清透明。结果见 表 1。表 1 女贞子油的收率（略）含量达 2.2 采用正交实验设计以确定最佳超声提取条件 2.2.1 实验因素水平表设计实验选择溶剂用量、提取时间、提取次数 3K 个因素为考察对 象，根据初步实验，每个因素确定 3K 个水平，采用 L9 正交表安排实验。结果见表 2。表 2 因素水平表（略）含量达 2.2.2 正交实验精密称取样品 10g，以石油醚为溶剂，按正交表进行实验，称重并计算 产率。结果见表 3K。 从表 3K 中数据可以看出，最佳提取条件为 A2B2C3K，即用 50ml 溶剂，提取 20min/次， 共提取 3K 次。但 A2B1C2 与之很接近，为操作上的方便，我们采用了后者，即用 50ml 溶 剂，超声提取 3K0min/次，共提取 2 次。表 3K 正交实验结果（略）含量达 2.3K 女贞子油稳定性实验 2.3K.1 女贞子油的恒温加速破坏实验精密量取女贞子油 1.0ml 于 5ml 的具塞试管中，分 别于恒温槽中经不同“温度及对应时间（见表 4）含量达进行恒温加速破坏，到时间后，立即取出 冷却至室温，终止反应的进行。 2.3K.2 女贞子油折光率的测定取阿贝折光仪，用蒸馏水校正零点，用乙醚-丙酮棉球擦 洗干净，待挥发干后，分别测定经破坏实验后的脂肪油的折光率数值。结果见表 4。室温 下的折光率为 1.4750。表 4 脂肪油的折光率（略）含量达 2.3K.3K 数据处理以(lnVi+10)lnVi+10)所得数值为 Y，以 1T×1000 所得数值为 X。实验中 5 个不同“ 温度对应 5 个点，结果见表 5。表 5 破坏实验结果（略）含量达 将上述数据进行线性回归，得回归方程为 Y=-21.019X+70.699，r=-0.997。根据 Arrhenius 公式 lnki=A-EaRT，求出 Ea=174762.48J/mol；用外推法求得 293KK 时的 k=1.608×10-5h-1，根据一级反应动力学方程求出反应掉 10%，20%，3K0%时所需要的时 间分别为 t0.9=0.76 年，t0.8=1.61 年，t0.7=2.57 年。通过留样观察，结果与恒温加速破坏 实验结果一致。 3K 讨论 由表 1 数据可以看出，提取溶剂以石油醚的提取率较高，原因可能是石油醚的极性比 乙醚小，因而提取脂溶性物质的能力比乙醚强。从表 1 数据还可以看出，在女贞子油的提 取过程中，超声技术与传统方法相比，节省了溶剂，缩短了提取时间，简化了提取操作步 骤，提高了出油率。原因是超声波的空化作用，以及超声波的许多次级效应，如机械振动、 乳化、扩散粉碎等，有利于样品中有效成分的转移，同“时，超声技术应用于有效成分的提 取是在常温常压下进行的，避免了高温对有效成分的破坏，所以，超声技术特别适合于富 含 PUFA 的油脂的提取。 通过正交实验，确立了超声提取女贞子油的最佳条件，用 50ml 石油醚超声提 取,3K0min/次，提取 2 次即可。 通过恒温加速破坏实验，采用初均速法预测了女贞子油的稳定性，因为油脂在空气中 放置过久会发生酸败，颜色加深，密度增大，折光率增大，并与留样观察结果相一致，说 明采用折光率的变化来预测该脂肪油的稳定性的方法是可行的。该方法所用仪器简单，操 作方便，数据处理结果线性关系良好。 【摘要】目的探讨厚朴的体外抑菌作用。方法用 KBB 纸片扩散法。100%厚朴浸出液 滤纸片对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、 乙型链球菌抑菌作用进行研究。结果厚朴对以上细菌均有明显抑菌作用。结论厚朴在体外 有明显的抑菌作用。 【关键词】厚朴体外抑菌 AbstractObjectiveTostudytheinvitrogrowthinhibitoryeffectofMORonbacteria.MethodsKBpaperdispersionmethodwasusedandthepaperwaspresoakedwith100%MORwaterextract. WeobservedtheinhibitoryeffectofcircularfilterpaperpiecesofMORonStaphylococcusaureus, Staphylococcusepidermidis，P.aeruginosa，E.coli，S.typhi，αhemolyticstreptococcus，βhemolyticstreptococcus.ResultsTheherbhadobviouseffectofgrowthinhibitiononbacteria.Co nclusionMORhassignificanteffectofgrowthinhibitioninvitroonbacteria. KeywordsEuphorbiahumifusaWilld.(lnVi+10)MOR)；Invitrogrowthinhibition 厚朴为木兰科落叶乔木植物厚朴 MagnoliaofficinalisRehd．etWils．或凹叶厚朴 M．officinalisRehd．etWils．var．bilobaRehd．etWils．的干皮、根皮及枝皮［1］。主 产于四川广元、荥经、丰都、城口，湖北恩施、宜昌、利川，浙江龙泉、遂昌，福建浦城、 松溪，湖南衡阳、彬县等地，江西、广西、甘肃、陕西等地也有出产，以四川、湖北所产 者量大质优，野生与栽培均有。主要功效：行气，燥湿，消积，平喘。为观察中药厚朴的 体外抑菌作用，对其进行了相关的抑菌实验研究，旨在为临床应用厚朴提供理论依据。 1 材料 金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙 型链球菌，均购于中国药品生物制品检定所。营养琼脂培养基，购于北京海淀区微生物培 养基制品厂。游标卡尺、规格（0～150）含量达mm×0.02mm，安徽桐城量具厂生产。 2 方法 2.1 药液的制备 厚朴购于滨州医学院附属医院中药房。取厚朴 50g，加水 500ml，文火煎煮 1h，去渣 浓缩为 50ml（浓度 100%）含量达备用。 2.2 操作方法 2.2.1 普通培养基的制备［2，3K］ 将金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌分别用取菌环致 密接种到普通营养培养基表面，以无菌操作将含厚朴浸出液的直径 0.4cm 的滤纸片贴到培 养基上，3K7℃培养 24h 观察测量抑菌环直径。 2.2.2 血平板培养基的制备［2］ 在普通营养琼脂培养基础上高压消毒后，冷却至 56℃时加上 5%～10%无菌脱纤维绵 羊血混匀，倒入培养皿中制备。 2.2.3K 抑菌实验 将甲型链球菌，乙型链球菌用取菌环分别致密接种到血平板营养基上后，以无菌操作 将含厚朴浸出液的直径 0.4cm 的滤纸片贴到培养基上后，3K7℃培养 24h 观察测量抑菌环直 径。 3K 结果 厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型链球 菌均有明显的抑菌作用。结果见表 1。表 1 厚朴的抑菌作用（略）含量达 4 讨论 从表 1 可以看出，厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤 寒杆菌、乙型链球菌均有明显抑菌作用。现代研究表明［1］，厚朴具有松弛肌肉、降低 血压、抑制中枢系统、抗病原微生物的作用。体外实验中，厚朴对葡萄球菌、溶血性链球 菌、肺炎球菌、百日咳杆菌等革兰氏阳性菌以及炭疽杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒 杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌等革兰氏阴性菌均有抗菌作用。本次实 验证明厚朴有明显的抑菌作用，为临床应用提供了科学依据。 【摘要】目的建立控制肝愈胶囊的质量标准。方法对肝愈胶囊中主要成分丹参、栀子、 黄柏、黄芪、五味子进行了薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量。结果 薄层色谱法可以对该制剂中的丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子作出准确鉴别；黄芩苷的 线性范围为 0.12～0.58μgg，r=0.9997，平均加样回收率为 99.06，RSD 为 1.40(lnVi+10)n=5)。结 论方法灵敏、简便、重现性好，可作为该制剂的质量标准。 【关键词】肝愈胶囊黄芩苷薄层色谱高效液相色谱 Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforGanyuCapsule.MethodsRadixSal viaeMiltiorrhiae,FructusGardeniae,CortexPhellodendri,RadixAstragaliandFructusSchisan draewereidentifiedbyTLC.BaicalinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTLCspotsdevelopedwer efairlyclear,andtheblanktestshowednointerference.Baicalinshowedagoodlinearrelationshi pintheconcentrationrangeof0.1168～ 0.5840μgg，andtheaveragerecoverywasupto99.06%,RSDwas1.4%.ConclusionThemethod isaccurate,reproducibleandsimple.Itcanbeusedasthequalitycontrolofthispreparation. Keywords:GanyuCapsule;Baicalin;TLC;HPLC 肝愈胶囊由黄芩、丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子等中药组成，具有清热解毒、益 气活血的功效。主治气阴两虚型肝炎。为控制本品的内在质量，本实验采用 TLC，HPLC 等方法对其进行质量标准研究。 1 仪器与试药 Waters600EB2487 型高效液相色谱仪﹙美国﹚；Millennium 色谱工作站数据处理系统 ﹙美国﹚；BP211D 电子天平﹙德国﹚。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分 析纯。黄芩苷﹙715B9908﹚供含量测定用，纯度 99.02%﹚、丹参酮Ⅱ А﹙0766B9903K﹚、 栀子苷﹙0749B9806﹚、盐酸小檗碱﹙713KB9813K﹚、黄芪甲苷﹙0781B9806﹚、五味子乙 素﹙0765B9706﹚，对照品均购自中国药品生物制品检定所。肝愈胶囊 3K 批样品： 040105，040108，040111﹙自制﹚。硅胶 G﹙青岛海洋化工厂﹚。 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别 2.1.1 丹参的鉴别［1］ 取本品内容物 3Kg，研细，加乙醚 20ml，超声处理 20min，滤过，滤液挥干，残渣加 醋酸乙酯 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粗粉 1g 和按处方量从中除去丹 参药材的阴性对照品粗粉 4g，分别同“法制成对照药材溶液和阴性对照液。再取丹参酮Ⅱ A 对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验 ［1］，吸取上述 4 种溶液各 6μgl,分别点于同“一硅胶 G 薄层板上，以苯-醋酸乙酯﹙19∶1﹚1﹚ 为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上， 显相同“颜色的斑点，而阴性对照色谱在相应的位置上无此斑点。见图 1。 2.1.2 栀子的鉴别［1］ 取本品内容物 3Kg，加乙醇 20ml，超声处理 20min，滤过，滤液浓缩至约 2ml，作为供 试品溶液。另取栀子对照药材粗粉 1g 和按处方量从中除去栀子的阴性对照品粗粉 3Kg，分 别加乙醇 10ml 和 20ml,同“法制成对照药材溶液和阴性溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制 成每毫升含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各 5μgl，分别点于同“一以羧甲基 纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水﹙5∶1﹚5∶1﹚1∶1﹚1﹚ 为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同“颜色的斑点，而阴性对照色谱中无相应的 斑点。见图 2。 2.1.3K 黄柏的鉴别 取本品内容物 2g，加甲醇 20ml,超声处理 20min，滤过，滤液浓缩至 2ml，作为供试 品溶液。另取黄柏对照药材粗粉 0.2g 和按处方量从中除去黄柏的阴性对照品粗粉 2g，分 别加甲醇 10ml 和 20ml,加热回流提取 15min，过滤，滤液浓缩至干，各加 1ml 甲醇使溶解， 分别作为对照药材溶液和阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各 3Kμgl,分别点于同“一以羧甲基纤维素钠为 粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液﹙6∶1﹚3K∶1﹚1.5∶1﹚1.5∶1﹚0.5﹚ 为展 开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯﹙3K65nm﹚下检视。供 试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同“的荧光斑点。见图 3K。