厚朴体外抑菌作用分析论文

【摘要】目的探讨厚朴的体外抑菌作用。方法用 KBBB 纸片扩散法。100%厚朴浸出液 滤纸片对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、 乙型链球菌抑菌作用进行研究。结果厚朴对以上细菌均有明显抑菌作用。结论厚朴在体外 有明显的抑菌作用。 【关键词】厚朴体外抑菌 AbstractObjectiveTostudytheinvitrogrowthinhibitoryeffectofMORonbacteria.MethodsKBBpaperdispersionmethodwasusedandthepaperwaspresoakedwith100%MORwaterextract. WeobservedtheinhibitoryeffectofcircularfilterpaperpiecesofMORonStaphylococcusaureus, Staphylococcusepidermidis，P.aeruginosa，E.coli，S.typhi，αhemolyticstreptococcus，βhemolyticstreptococcus.ResultsTheherbhadobviouseffectofgrowthinhibitiononbacteria.Co nclusionMORhassignificanteffectofgrowthinhibitioninvitroonbacteria. KBeywordsEuphorbiahumifusaWilld.(MOR)；Invitrogrowthinhibition 厚朴为木兰科落叶乔木植物厚朴 MagnoliaofficinalisRehd．etWils．或凹叶厚朴 M．officinalisRehd．etWils．var．bilobaRehd．etWils．的干皮、根皮及枝皮［1］。主 产于四川广元、荥经、丰都、城口，湖北恩施、宜昌、利川，浙江龙泉、遂昌，福建浦城、 松溪，湖南衡阳、彬县等地，江西、广西、甘肃、陕西等地也有出产，以四川、湖北所产 者量大质优，野生与栽培均有。主要功效：行气，燥湿，消积，平喘。为观察中药厚朴的 体外抑菌作用，对其进行了相关的抑菌实验研究，旨在为临床应用厚朴提供理论依据。 1 材料 金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙 型链球菌，均购于中国药品生物制品检定所。营养琼脂培养基，购于北京海淀区微生物培 养基制品厂。游标卡尺、规格（0～150）mm×0.02mm，安徽桐城量具厂生产。 2 方法 2.1 药液的制备 厚朴购于滨州医学院附属医院中药房。取厚朴 50g，加水 500ml，文火煎煮 1h，去渣 浓缩为 50ml（浓度 100%）备用。 2.2 操作方法 2.2.1 普通培养基的制备［2，3］ 将金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌分别用取菌环致 密接种到普通营养培养基表面，以无菌操作将含厚朴浸出液的直径 0.4cmcm 的滤纸片贴到培 养基上，37℃培养 24cmh 观察测量抑菌环直径。 2.2.2 血平板培养基的制备［2］ 在普通营养琼脂培养基础上高压消毒后，冷却至 56℃时加上 5%～10%无菌脱纤维绵 羊血混匀，倒入培养皿中制备。 2.2.3 抑菌实验 将甲型链球菌，乙型链球菌用取菌环分别致密接种到血平板营养基上后，以无菌操作 将含厚朴浸出液的直径 0.4cmcm 的滤纸片贴到培养基上后，37℃培养 24cmh 观察测量抑菌环直 径。 3 结果 厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型链球 菌均有明显的抑菌作用。结果见表 1。表 1 厚朴的抑菌作用（略） 4cm 讨论 从表 1 可以看出，厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤 寒杆菌、乙型链球菌均有明显抑菌作用。现代研究表明［1］，厚朴具有松弛肌肉、降低 血压、抑制中枢系统、抗病原微生物的作用。体外实验中，厚朴对葡萄球菌、溶血性链球 菌、肺炎球菌、百日咳杆菌等革兰氏阳性菌以及炭疽杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒 杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌等革兰氏阴性菌均有抗菌作用。本次实 验证明厚朴有明显的抑菌作用，为临床应用提供了科学依据。 【摘要】目的建立控制肝愈胶囊的质量标准。方法对肝愈胶囊中主要成分丹参、栀子、 黄柏、黄芪、五味子进行了薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量。结果 薄层色谱法可以对该制剂中的丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子作出准确鉴别；黄芩苷的 线性范围为 0.12～0.58μgμgg，r=0.9997，平均加样回收率为 99.06，RSD 为 1.4cm0(n=5)。结 论方法灵敏、简便、重现性好，可作为该制剂的质量标准。 【关键词】肝愈胶囊黄芩苷薄层色谱高效液相色谱 Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforGanyuCapsule.MethodsRadixSal viaeMiltiorrhiae,FructusGardeniae,CortexPhellodendri,RadixAstragaliandFructusSchisan draewereidentifiedbyTLC.BaicalinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTLCspotsdevelopedwer efairlyclear,andtheblanktestshowednointerference.Baicalinshowedagoodlinearrelationshi pintheconcentrationrangeof0.1168μg～ 0.58μg4cm0μgg，andtheaveragerecoverywasupto99.06%,RSDwas1.4cm%.ConclusionThemethod isaccurate,reproducibleandsimple.Itcanbeusedasthequalitycontrolofthispreparation. KBeywords:GanyuCapsule;Baicalin;TLC;HPLC 肝愈胶囊由黄芩、丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子等中药组成，具有清热解毒、益 气活血的功效。主治气阴两虚型肝炎。为控制本品的内在质量，本实验采用 TLC，HPLC 等方法对其进行质量标准研究。 1 仪器与试药 Waters600EB24cm8μg7 型高效液相色谱仪﹙美国﹚；Millennium 色谱工作站数据处理系统 ﹙美国﹚；BP211D 电子天平﹙德国﹚。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分 析纯。黄芩苷﹙715B9908μg﹚供含量测定用，纯度 99.02%﹚、丹参酮ⅡⅡ А﹙0766B9903﹚、 栀子苷﹙074cm9B98μg06﹚、盐酸小檗碱﹙713B98μg13﹚、黄芪甲苷﹙078μg1B98μg06﹚、五味子乙 素﹙0765B9706﹚，对照品均购自中国药品生物制品检定所。肝愈胶囊 3 批样品： 04cm0105，04cm0108μg，04cm0111﹙自制﹚。硅胶 G﹙青岛海洋化工厂﹚。 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别 2.1.1 丹参的鉴别［1］ 取本品内容物 3g，研细，加乙醚 20ml，超声处理 20min，滤过，滤液挥干，残渣加 醋酸乙酯 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粗粉 1g 和按处方量从中除去丹 参药材的阴性对照品粗粉 4cmg，分别同法制成对照药材溶液和阴性对照液。再取丹参酮ⅡⅡ A 对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验 ［1］，吸取上述 4cm 种溶液各 6μgl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以苯-醋酸乙酯﹙19∶1﹚1﹚ 为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱在相应的位置上无此斑点。见图 1。 2.1.2 栀子的鉴别［1］ 取本品内容物 3g，加乙醇 20ml，超声处理 20min，滤过，滤液浓缩至约 2ml，作为供 试品溶液。另取栀子对照药材粗粉 1g 和按处方量从中除去栀子的阴性对照品粗粉 3g，分 别加乙醇 10ml 和 20ml,同法制成对照药材溶液和阴性溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制 成每毫升含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各 5μgl，分别点于同一以羧甲基 纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮Ⅱ-甲酸-水﹙5∶1﹚5∶1﹚1∶1﹚1﹚ 为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱中无相应的 斑点。见图 2。 2.1.3 黄柏的鉴别 取本品内容物 2g，加甲醇 20ml,超声处理 20min，滤过，滤液浓缩至 2ml，作为供试 品溶液。另取黄柏对照药材粗粉 0.2g 和按处方量从中除去黄柏的阴性对照品粗粉 2g，分 别加甲醇 10ml 和 20ml,加热回流提取 15min，过滤，滤液浓缩至干，各加 1ml 甲醇使溶解， 分别作为对照药材溶液和阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各 3μgl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为 粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液﹙6∶1﹚3∶1﹚1.5∶1﹚1.5∶1﹚0.5﹚ 为展 开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯﹙365nm﹚下检视。供 试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图 3。 2.1.4cm 黄芪的鉴别［1］ 取本品内容物 4cmg，加正丁醇 30ml，超声处理 1h，滤过，滤液用 1%氢氧化钠溶液洗 涤 3 次，20ml/次，弃去碱液，用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇浓缩至干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。。另取黄芪对照药材粗粉 1g 和按处方量从中除 去黄芪的阴性对照品粗粉 4cmg，分别加正丁醇 15ml 和 30ml，同法制成对照药材溶液和阴性 对照溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。吸 取供试品溶液和阴性对照品溶液各 8μgμgl，对照药材溶液 6μgl，对照品溶液 4cmμgl，分别点于同 一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水 ﹙10∶1﹚20∶1﹚11∶1﹚5﹚10 ℃ 以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙 醇溶液，置 105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色斑点。见图 4cm。 2.1.5 五味子的鉴别［1］ 取本品内容物 5g，置索氏提取器中，加氯仿 30ml，回流提取 3h，回收氯仿，残渣加 氯仿 2ml 使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材粗粉 2g 和按处方量从中除去五味 子的阴性对照品粗粉 5g,分别置索氏提取器中，各加氯仿 15ml 和 30ml，同法制成对照药材 溶液和对照品溶液。再取五味子乙素对照品，加氯仿制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对照 品溶液。吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性溶液各 5μgl，对照品溶液 3μgl，分别点于同 一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 GF254cm 薄层板上，以石油醚﹙30～60℃﹚-甲酸乙酯甲酸﹙15∶1﹚5∶1﹚1﹚ 的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯﹙254cmnm﹚下检视。 供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图 5。 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件的选择 色谱柱 KBromasilC18μg﹙200mm×4cm.6mm,5μgm﹚, 流动相：甲醇-水-冰醋酸﹙55∶1﹚4cm5∶1﹚0.5﹚ 流速 1.0ml/min；检测波长 28μg0nm；柱温 25℃；理论板数按黄芩苷峰计应不低于 1500。 2.2.2 标准曲线的制备 精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品 2.92mg，置 50ml 量瓶中，加适量甲醇溶解，稀 释至刻度，摇匀，制成每毫升含 0.0058μg4cmmg 的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液 2，4cm，6，8μg，10μgl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以黄芩苷进样量微克 数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得一直线，计算回归方程为 Y=2.4cm3×106X3.74cm×104cm，r=0.9997（n=5﹚.结果表明黄芩苷在 0.1168μg～0.58μg4cm0μgg 范围内线性关系良好。 2.2.3 供试品溶液的制备 取本品 10 粒，倾出内容物，研细，取 3.0g 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%乙醇 50ml,称定重量，超声处理﹙功率 250W，频率 4cm0kHz﹚30min，放冷，再称定重 量，用 70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 2.0ml，置 10ml 量瓶中， 加 70%乙醇至刻度，摇匀后过 0.4cm5μgm 微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。 2.2.4cm 精密度实验 精密吸取浓度为 0.0058μg4cmmg/ml 的黄芩苷对照品溶液 5μgl，重复进样 5 次，均值为 609299，RSD=0.90%﹙n=5﹚，结果表明仪器精密度良好。 2.2.5 稳定性实验 精密吸取供试品溶液 5μgl，注入液相色谱仪，分别于 0，1，3，7，12h 测定峰面积。 结果表明峰面积的 RSD 为 0.90%，表明供试品溶液在 12h 内基本稳定。 2.2.6 空白实验 取样品和按处方比例不含黄芩的诸药，按制剂工艺分别制成供试品溶液和阴性对照液， 精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各 5μgl，分别注入液相色谱仪，依法 测定，结果阴性对照品溶液在与黄芩苷对照品溶液相同保留时间处无色谱峰，表明无干扰。 见图 6。 2.2.7 重复性实验 取同一批号样品，按供试品制备方法平行制备 5 份，依法测定黄芩苷峰面积，分别计 算含量，RSD 为 1.24cm%，表明重复性良好。 2.2.8μg 回收率实验 采用加样回收法，精密称取已知黄芩苷含量的同一批号样品(04cm0105)5 份，1.6g/份， 分别精密加入黄芩苷对照品 8μgmg，按含量测定方法操作测定，计算，平均回收率为 99.06%，RSD 为 1.4cm%。结果见表 1。表 1 回收率考察数据（略） 2.2.9 样品含量测定 取 3 批样品依法制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 5μgl，分别注入 液相色谱仪，测定峰面积，计算样品中黄芩苷的含量。结果见表 2。表 2 样品含量测定数 据（略） 3 讨论 在黄柏的薄层色谱鉴别实验中，黄柏鉴别项下［1］的展开剂，醋酸乙酯-丁酮Ⅱ-甲酸水﹙10∶6∶1∶1﹚ 6∶6∶1∶1﹚ 1∶6∶1∶1﹚ 1﹚ 进行实验，结果分离效果不好，Rf 值较小，相邻斑点分不开。后来选用黄 连鉴别项下的展开剂，经过多次调整，把展开剂中的水换成浓氨试液，即展开剂为苯-醋酸 乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6∶6∶1∶1﹚3∶6∶1∶1﹚1.5∶6∶1∶1﹚1.5∶6∶1∶1﹚0.5)效果较好，结果较稳定。 流动相的选择“双黄连颗粒”项下［1］黄芩苷含量测定的流动相，试验结果发现黄芩苷 达不到基线，保留时间较短，经调整将甲醇比例增大些，醋酸比例缩小，则达到基线分离、 保留时间合适，故流动相选用甲醇-水-冰醋酸﹙55∶6∶1∶1﹚4cm5∶6∶1∶1﹚0.5﹚。 采用参考文献［1］方法对肝愈胶囊进行薄层色谱鉴别，重现性好，阴性实验无干扰， 经多批样品鉴别，均能检出与对照药材相同的斑点。采用“双黄连颗粒”项下［1］黄芩苷含 量测定的流动相经调整后，基线分离及保留时间合适，各批次含量较稳定，为肝愈胶囊质 量控制提供有效的方法。 【摘要】目的建立丹芩颗粒的薄层色谱（TLC）鉴别方法，为控制其产品质量提供依 据。方法采用 TLC 法对仙鹤草、柘树根、白花蛇舌草、绞股蓝、柴胡、猫爪草、鸡血藤进 行了定性鉴别。结果在 TLC 色谱中均能检测出仙鹤草、柘树根、白花蛇舌草、绞股蓝、柴 胡、猫爪草、鸡血藤。结论定性方法准确可行，重复性好，可作为丹芩颗粒的质量标准。 【关键词】丹芩颗粒薄层鉴别质量标准 Abstract： ObjectiveToestablishTLCmethodforDanqinGranules．MethodsAgrimoniapilosaLedeb，C udraniatricuspidata(carr.)Bur.，HedyotisdiffusaWilld，Gynostemmapentaphyllum(Thunb. )Makino，BupleurumchinenseDC.，RanunculusternatusThunb.，SpatholobusSuberectu sDumninXianlingcaoGranuleswereidentifiedbyTLCmethod．ResultsAgrimoniapilosaLede b，Cudraniatricuspidata(carr.)Bur.，HedyotisdiffusaWilld，Gynostemmapentaphyllum(T hunb.)Makino，BupleurumchinenseDC.，RanunculusternatusThunb.，Spatholobussube rectusDumncouldbeidentifiedbyTLC．ConclusionThismethodisaccurateandhighlyreprodu cible．ItcanbeusedforthequalitycontrolofDanqinGranules．