北五味子多糖提取论文

【摘要】目的建立提取和测定北五味子中多糖含量的方法。方法采用比色法测定北五 味子中多糖含量。结果测得北五味子中多糖含量为 6.57%，平均回收率为 99.78%，RSD=1.54%。结论该方法简便、精密度及重现性均较好，结果令人满意。 【关键词】北五味子多糖提取含量测定 ExtractionandDeterminationofPolysaccharidefromSchisandrachinensis(Turcz)BaillFr uit Abstract： ObjectiveToestablishamethodfortheextractionanddeteminationofpolysaccharidefromSchis andrachinensis(Turcz)BaillFruit.MethodsPolysaccharideinSchisandrachinensis(Turcz)Bail lFruitwasdeterminedbythemethodofSpectrophotometry.ResultsThepolysacharidesinSchis andrachinenisis(Turcz)BaillFruitwas6.57%,theaveragerecoverywas99.78%,RSDwas1.54 %.ConclusionThismethodissimple，theresultisstable，reproducible,andsatisfactory. Keywords：Schisandrachinensis(Turcz)Baill； Polysaccharide;Extraction;Determination 北五味子 Schisandrachinensis(Turcz）BaillFruit 是木兰科植物五味子的干燥成熟果实， 是著名的滋补性中药，因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故名五味子，具有敛肺、 滋肾、生津、收汗、涩精之功效。现代药理研究证实五味子对中枢神经系统、呼吸系统均 有兴奋作用，亦能促进肝糖原异生，加快肝糖原分解，在治疗神经衰弱、肝炎等的药物中 应用十分广泛。五味子有南北之分，据《本草纲目》记载“五味子南产者红，北产者黑，入“五味子南产者红，北产者黑，入 滋补药，必用北者为良”，北五味子的化学成分主要为五味子木脂素、挥发油、五味子醇、”，北五味子的化学成分主要为五味子木脂素、挥发油、五味子醇、 多糖等［1］。近年来对多糖提取工艺的研究方法很多，如热水浸提法、稀碱液浸提法、 稀酸液浸提法。但多糖是由单糖基通过糖苷键连接而成的化合物，在稀酸、稀碱条件下， 易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，因此本文采用热 水浸提法，用苯酚-硫酸法测定北五味子多糖的含量，得到满意的结果。 1 仪器与药品 北五味子购于张家口市药材公司经鉴定为北五味子，其它试剂均为国产分析纯； UV752752752 分光光度计（上海第三仪器厂）；GOA 型电热真空干燥箱（天津东郊机械加工 厂）；RE75252A 型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。 2 方法与结果 2.1 葡萄糖储备液的配制精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖 100mg，用蒸馏水溶解 并定容到 100ml。 2.2 苯酚溶液的配制取苯酚 100g，加铝片 0.1g 和 NaHCO30.05g，蒸馏，收集 182℃ 馏份，称取 7.5g，加水 150ml 溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。 2.3 测定条件选择 2.3.1 反应温度选择精密吸取葡萄糖储备液 1.0ml 于 100ml 容量瓶中，用水稀释至刻度， 作为对照品溶液。分别吸取葡萄糖对照品液 1.0ml 于两个具塞试管中，各加苯酚液 1.0ml， 并分别迅速滴加浓硫酸 5.0ml。另取两份 1.0ml 水同上操作，为空白液。一份于水浴中煮沸 15min，另一份于 40℃水浴中恒温 30min 取出，冷却至室温，15min 后于 490nm 处测其 吸光度值，分别为 0.112 和 0.126。因此，本实验采用 40℃恒温 30min 的方法。 2.3.2 苯酚及硫酸用量选择吸取葡萄糖对照品液 1.0ml5 份，分别加入苯酚液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别加水至 2.0ml，再各滴加浓硫酸 5.0ml，40℃恒温 30min 后，测其吸光度值，分别为 0.095，0.112，0.125，0.127，0.126，可见加入苯酚液 0.6ml 以上时，反应都能完成；另取葡萄糖对照品液 1.0ml5 份，分别加苯酚液 1.0ml，再分别滴 加浓硫酸 2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml，并均用水稀释至 8.0ml，加入硫酸体积占总体积的 62.5%以上时的结果较满意。 2.3.3 反应时间选择及稳定性取葡萄糖对照品溶液 1.0ml3 份，各加苯酚液 1.0ml，浓硫 酸 5.0ml，于 40℃分别恒温 20，30，40min。测得吸光度值分别为 0.16，0.125，0.126， 可见加热 30min 即可使反应完全。另测反应完成后样品在不同时间内的吸光度值，结果 3h 内稳定。 2.4 标准曲线绘制精密量取葡萄糖标准溶液 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml 置具塞试 管中，分别加蒸馏水使成 1.0ml，再分别加入苯酚溶液 1.0ml，摇匀，然后加浓硫酸 5.0ml，充分摇匀，于 40℃水浴中恒温 30min，取出，冷却至室温，另以蒸馏水同上操作 为空白对照，在 490nm 处测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程： A=0.06781C+0.00620471，r=0.9998。 2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液 1.0ml，6 份，同 2.4 项下操作，结果显示吸光度 的 RSD=1.45%。 2.6 多糖的提取流程北五味子粉碎后，称取 500g，用清水洗净，加水 4500ml，微沸煎 煮 1h。过滤，滤渣加水 2000ml，煎煮 1h，过滤，合并提取液，加热浓缩至 300ml。加入 乙醇使乙醇含量为 80%放置 12h，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮反复洗涤，得到棕色 粗多糖。将粗多糖溶于水，用 seveg 法除去蛋白，加入 1%活性碳脱色，抽滤，滤液加入 乙醇，使溶液含醇达 80%，静置过夜，抽滤，残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空干燥， 即得精制北五味子多糖。 2.7 换算因子测定 精确称取 60℃干燥恒重的五味子多糖 20mg，加水溶解后定容到 100ml 容量瓶中，摇 匀，作为多糖储备液精确量取多糖储备液 0.2ml，加水至 1.0ml 按测量标准曲线同样的方法 测其吸光度值，根据标准曲线计算浓度。按下式计算换算因子：f=W/CD 式中：W 为多糖 重量（μgg），C 为测试液中据标准曲线方程计算得到的单糖浓度（μgg·ml-1）D 为多糖的稀 释因子，测得 f=1.748，（n=6）。 2.8 样品含量的测定 准确称取干燥五味子粉末 100mg，3 份，分别置于索氏提取器中，用 80%乙醇回流提 取 1h，改用水微沸煎煮，3 份分别煎煮 1，2，3 次，各定容至 100ml，为样品液。分别精 密吸取上述样品液 10ml，分别定容至 100ml，各取 1.0ml，按 2.4 项下操作，平行做 6 次， 并按下式计算多糖含量（以粗多糖计）。结果见表 1。表明提取两次即可。多糖含量 （%）=CDf/W×100。式中：C 为样品溶液的葡萄糖的浓度（μgg·ml-1），D 为样品溶液的 稀释因子，f 为换算因子，W 为样品的重量（μgg）。表 1 样品中多糖的含量（略） 2.9 回收率测定精密吸取样品液 0.5ml（6 份）再分别精密加入不同量的标准溶液，依 样品测定方法测定吸光度，计算回收率平均值为 99.78%，RSD=1.54%。 3 讨论 3.1 苯酚752 硫酸比色法是测定多糖含量较经典有效的方法之一，但各自的报道中，对反应温度的 控制、试剂中苯酚及硫酸用量不尽相同。常见的反应温度有煮沸、40℃恒温和室温 3 种， 鉴于冬天和夏天室温相差较大，本实验仅比较于前两种条件，证实本法以 40℃恒温 30min 较好。加入苯酚量 0.6ml 以上时，反应能完成。对于硫酸的用量，经实验对比认为硫酸占 总体积 62.5%以上时，在重现性、稳定性及回收率方面都有明显的优越性，并且与文献报 道一致［2］。 3.2 实验结果表明，北五味子多糖提取两次即可，平均含量为 6.57%，比文献报道的 稍低［3］，这可能与北五味子的产地、采收季节等因素有关。 3.3 五味子粗多糖的初步药理研究表明［4］，五味子粗多糖能明显提高小鼠的耐缺氧 能力，具有抗疲劳作用，亦能使正常小鼠胸腺和脾脏的重量的增加。说明五味子粗多糖能 够提高机体对环境的适应能力和防御能力。而北五味子多糖含量较高，这可能是北方五味 子药效较优的原因之一，但是北五味子多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。