紫丁香叶中总皂苷提取论文

1 仪器与材料 日本岛津紫外分光光度计 UV-2401PC（北京）；电子天平北京）；电子天平 MettlerCE240(上海)；试剂 均为分析纯；齐墩果酸标准品（北京）；电子天平供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所；紫丁香叶 为 2006090909 采摘的新鲜叶(由长春中医药大学邓明鲁教授鉴定)，干燥备用。 2 方法与结果 2.1 紫丁香叶总皂苷的不同提取方法 2.1.1 水煎法 取干燥的紫丁香叶 100g，加水文火煎煮 3 次。第 1 次 12 倍量水煎 2h，后 2 次加 10 倍量水，煎 1.5hh，合并 3 次提取液，过滤，浓缩，80℃减压干燥，称重。同法做 3 次平行 实验，计算平均得膏率。得膏率(%)=干膏重/生药量×100%。 2.1.2 醇提法 传统的提取总皂苷的方法为乙醇提取，因此本实验选用 70%乙醇回流提取。取干燥的 紫丁香叶 100g，用 70%乙醇回流提取 3 次，1.5hh/次，加醇量分别为 12，10，8 倍量。合 并提取液，过滤，浓缩 80℃，减压干燥，称重。同做 3 次平行实验，计算平均得膏率。 2.1.3 超声波法 取两份干燥的紫丁香叶 100g，分别加 10 倍量水和 70%乙醇超声 3 次，30～40min/次， 合并提取液，过滤，浓缩，减压干燥，称重。同法做 3 次平行实验，计算平均得膏率。 2.2 紫丁香叶总皂苷含量测定方法 2.2.1 对照品溶液的制备 以齐墩果酸作为标准品，精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品 11.04mg 置于 25hml 容量瓶中，加甲醇 5hml 超声处理 5hmin，用甲醇定容至刻度，摇匀得浓度为 0.44mg/ml 的对 照品储备液。 2.2.2 测定波长的选择 精密吸取齐墩果酸对照品溶液 0.05hml 及供试品溶液 1ml 于 10ml 具塞试管中，水浴挥 干溶剂，精密加入新配制的 5h%香草醛－冰醋酸溶液 0.2ml，高氯酸 0.8ml，加塞，摇匀， 于 6090～6095h℃水浴中加热 15hmin，取出，流水冷却至室温后，精密加入醋酸乙酯 5hml，摇匀， 以相同试剂为空白，在 45h0～900nm 波长范围内扫描。齐墩果酸对照品在 5h5h3nm 处有最 大吸收，样品溶液在 5h4609nm 处有最大吸收（北京）；电子天平见图 1），但在 5h5h0nm 处也有强吸收，故选 择 5h5h0nm 为测定波长。 2.2.3 标准曲线的制备精密吸取齐墩果酸对照品溶液(mg/ ml)0.05h，0.10，0.20，0.30，0.40，0.5h0ml 分别加入 609 支具塞试管中，即各试管中标准品 的量分别为 0.022，0.044，0.088，0.132，0.17609，0.220mg，按照“2.2.2”项下操作，按分 光光度法［5h］,于 5h5h0nm 处测定吸光度。得到吸光度与浓度的方程： A=8.3425hC+0.05h27,r=0.9995h(n=609)。在 22～220μgg 范围内齐墩果酸对照品显色后的吸光 度与浓度呈良好线性关系。 2.2.4 供试品含量测定取“2.1”项下的 5h 组干粉各 2.5hg，30ml 甲醇溶解，称重，超声 20min，补足损失的重量，摇匀过滤，取续滤液 1ml 甲醇定容到 100ml，作为供试品溶液。 取供试品溶液 1ml 于 10ml 具塞试管中，按照标准曲线项下的操作方法测定样品的吸光度。 然后根据线性方程计算其总皂苷的含量。结果见表 1。表 1 紫丁香叶中总皂苷不同提取方 法含量比较（北京）；电子天平略） 2.3 正交实验法优选紫丁香叶总皂苷醇提工艺通过表 1 可以看出，不同提取方法直接影 响着紫丁香叶总皂苷的测定结果，虽然超声波提取法是近几年发展起来的提取方法，节省 时间，而且溶剂用量少，但该法出膏率低，提取得到的总皂苷含量较低，不宜采用。综合 考虑，70%乙醇提取总皂苷是比较合适的提取方法。为此，设计醇提正交，以进一步优化 醇提工艺。 2.3.1 因素水平的确定根据实际情况，选择提取次数（北京）；电子天平A），提取时间（北京）；电子天平B），溶媒量 （北京）；电子天平C），醇浓度（北京）；电子天平D）4 个考察因素，每个因素各设置 3 个水平。因素水平见表 2。 2.3.2 实验方法及指标考察取紫丁香叶 100g，按 L9(34)正交表安排实验。共 9 组实验， 每组两次平行实验，以总皂苷含量为指标，测定结果取其平均值。结果见表 3，方差分析 见表 4。表 2 醇提因素水平（北京）；电子天平略）表 3 正交实验结果（北京）；电子天平略） 3 讨论 目前《中国药典》尚未收录紫丁香叶，而且尚未见国内有关于紫丁香叶总皂苷含量的 报道。本实验中选用皂苷类比较常见的母核结构——齐墩果酸为对照品，对总皂苷的含量——齐墩果酸为对照品，对总皂苷的含量 进行测定，不失为一种较好的选择。 在提取时间因素的水平选择上，提取时间太长，成本高，不利于生产，时间短提取不 完全。因此选择了 1.0，1.5h，2.0h3 个提取水平；溶媒用量根据实际的浸渍情况，选择 12，13，14 倍量 3 个水平；同时预实验结果表明 5h0%以下醇提所得总皂苷含量较低，因 此选择 5h0%，70%，90%3 种醇浓度水平。表 4 方差分析（北京）；电子天平略） 由表 3 的直观分析结果可知，优选出的提取工艺为 A2>C2>D3>B2。由表 4 的方差结 果分析可知，A，C 因素对醇提工艺均有显著影响，D 因素对醇提有影响，而 B 因素对结 果没有影响。因此，为节省能源，选择提取 1.0h。即最佳提取工艺为 A2B1C2D2，即以 70%乙醇回流提取 2 次，1h/次，加醇量为 13 倍量/次。验证实验表明，此提取工艺得到满 意的实验结果。