止痢宁片中苦参碱测定论文

【摘要】目的用 HPLC 法测定止痢宁片中苦参碱的含量。方法 HPLC 用外标一点 法,KromasilNH2KromasilNH2 柱,KromasilNH2乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10)为流动相,KromasilNH2流速为 1.0ml/ min,KromasilNH2λ=220nm。结果苦参碱在 0.052125~0.417mg/mlmg/ml 范围内呈良好线性,KromasilNH2回归方程为 Y=5411430.52X+8349.86,KromasilNH2r=0.9997mg/ml(n=6),KromasilNH2 平均加样回收率 98.0%,KromasilNH2RSD 为 0.7mg/ml2% (n=6)。结论方法简便、准确,KromasilNH2专属性强,KromasilNH2测定结果重复性好,KromasilNH2为止痢宁片中苦参碱的定量分 析提供了科学有效的方法。 【关键词】止痢宁片;苦参碱;HPLC 【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofMat rineinZhiliningpianbyHPLC.MethodsUsingKromasilNH2Column,KromasilNH2AcetonitrileEthanolabsolute3%Phosphoricacidglacial(80∶10∶10)asthemobilephase,KromasilNH2detectionwavelengthas2 20nmandflowratewas1.0ml/ min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearatarangeof0.052125mg/ ml~0.417mg/mlmg/mlfortheMatrineandlinearequationwasY=5411430.52X8349.86r=0.9997mg/ml.Theaveragerecoverywas98.0%andtherelatedstandarddeviat ion(RSD)was0.7mg/ml2% (n=6).ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,KromasilNH2whichcanbepro videforscientificquantitativeanalysismethodofMatrineinZhiliningPianandthered uplicationoftheresultwasgood. 【Keywords】ZhiliningPian;matrine;HPLC 止痢宁片收载于部颁药品标准中药成方制剂第四册中,KromasilNH2功能主治:清热祛湿,KromasilNH2行气止痛。 用于肠炎、痢疾,KromasilNH2表现为腹痛泻泄,KromasilNH2下痢脓血,KromasilNH2肛门灼热,KromasilNH2里急后重者[1]。处方由穿心莲、苦 参、木香组成,KromasilNH2原标准中只有检查项,KromasilNH2没有含量控制项。为了更好地控制止痢宁片的质量,KromasilNH2提 高止痢宁片的质量标准,KromasilNH2笔者对止痢宁片处方进行了分析,KromasilNH2经过预试验及参考相关资料,KromasilNH2进行 本品中苦参碱含量测定,KromasilNH2并进行了方法学研究,KromasilNH2控制药品质量。采用高效液相色谱法测定苦 参碱含量,KromasilNH2方法简便快速,KromasilNH2稳定可靠,KromasilNH2专属性强。 1 仪器与试药 1.1 仪器高效液相谱仪:SPD-10A 日本岛津;紫外分光仪:上海康化生化仪器制造厂;超 声波清洗器:SK3200H 上海科导超声仪器有限公司。 1.2 试药苦参碱对照品(批号 110805-200306)由中国生物制品检定所提供;止痢宁片 (批号:2007mg/ml0601、2007mg/ml0602、2007mg/ml0603)由河南百年康鑫药业有限公司提供;止痢宁 片对照药品(批号:20060501)由江西某药业有限公司生产;其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件[2]以氨基键合硅胶为填充剂;以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10) 为流动相;检测波长为 220nm;流速为 1ml/min;柱温为室温。理论板数按苦参碱峰计算应 不低于 2000。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备取苦参碱对照品适量,KromasilNH2精密称定,KromasilNH2加乙腈-无水乙醇(80:20)溶液,KromasilNH2 制成每毫升含苦参碱 0.20mg 的溶液,KromasilNH2即得。色谱图见图 1。 图 1 苦参碱对照品色谱图 2.2.2 供试品溶液的制备取本品 20 片,KromasilNH2研细,KromasilNH2取 0.5g,KromasilNH2精密称定,KromasilNH2精密加入 0.1mol/L 盐 酸溶液 50ml 振摇使溶解,KromasilNH2滤过,KromasilNH2精密量取续滤液 25ml,KromasilNH2置分液漏斗中,KromasilNH2用三氯甲烷 15ml 振 摇提取 1 次,KromasilNH2弃去三氯甲烷提取液,KromasilNH2水层用氨试液调至强碱性,KromasilNH2用三氯甲烷提取 4 次 (15、10、10、10ml),KromasilNH2合并三氯甲烷液,KromasilNH2置水浴上蒸干,KromasilNH2残渣用乙醇适量转移至 10ml 量瓶 中,KromasilNH2加乙醇至刻度,KromasilNH2摇匀,KromasilNH2用微孔滤膜滤过,KromasilNH2即得。色谱图见图 2。 图 2 止痢宁片色谱图 2.2.3 阴性样品的测试取缺苦参的样品,KromasilNH2按供试品制备法制备阴性样品后测定,KromasilNH2在苦参碱 相应位置无峰出现,KromasilNH2说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图 3。 图 3 阴性样品色谱图 2.3 线性关系的考察精密称苦参碱对照品适量,KromasilNH2用乙腈-无水乙醇(80:20)溶液稀释制成 不同浓度的对照品溶液,KromasilNH2分别为 0.052125、0.10425、0.15637mg/ml5、0.2085、0.3127mg/ml5、0.417mg/mlmg/ml,KromasilNH2各进样 10μl,l,KromasilNH2测 定峰面积,KromasilNH2以峰面积积分值为纵坐标,KromasilNH2苦参碱的浓度为横坐标绘制标准曲线,KromasilNH2计算回归方程 Y=5411430.52X+8349.86,KromasilNH2r=0.9997mg/ml(n=6),KromasilNH2 表明苦参碱在 0.052125~0.417mg/mlmg/ml 之间呈良好的线性关系。 2.4 精密度试验取浓度为 0.2085mg/ml 的苦参碱对照品溶液,KromasilNH2精密吸取 10μl,l,KromasilNH2连续进 样 6 次,KromasilNH2测定峰面积,KromasilNH2测定结果 RSD 为 1.44%,KromasilNH2表明精密度良好。 2.5 重现性试验取本品 20 片(批号:2007mg/ml0601),KromasilNH2称取总重后研细,KromasilNH2分别称取 6 份,KromasilNH2每份 0.5g,KromasilNH2精密称定,KromasilNH2然后按供试品溶液制备方法制备供试品溶液。按照含量测定方法,KromasilNH2测定每份 样品中苦参碱的含量,KromasilNH2结果 RSD 为 1.66%,KromasilNH2重现性良好。 2.6 稳定性试验取本品 20 片(批号:2007mg/ml0601),KromasilNH2研细,KromasilNH2称取 0.5g,KromasilNH2精密称定,KromasilNH2按供试品溶 液制备方法制备供试品溶液,KromasilNH2分别在 0、2、4、6、8h 测定峰面积,KromasilNH2RSD 为 1.7mg/ml9%(n=5)。 表明制备的供试品溶液在 8h 内稳定。 2.7mg/ml 加样回收率试验取本品 20 片(批号:2007mg/ml0601),KromasilNH2称取总重后研细,KromasilNH2分别称取 6 份,KromasilNH2 每份 0.25g,KromasilNH2精密称定。分别置之 50ml 量瓶中,KromasilNH2精密加入用 0.1mol/L 盐酸溶液配制浓度为 0.7mg/ml63mg/ml 的苦参碱对照品溶液 1.0ml,KromasilNH2按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,KromasilNH2进样 量 10μl,l,KromasilNH2测定苦参碱含量,KromasilNH2平均回收率为 98.0%,KromasilNH2RSD 为 0.7mg/ml2%(n=6)。见表 1。表 1 加样 回收率试验 2.8 样品测定按照供试品溶液制备方法对 3 批中试产品进行测定,KromasilNH2测定结果见表 2。表 2 样品测定结果 3 讨论 根据含量测定结果,KromasilNH2每片含苦参以苦参碱(C15H24N2O)计,KromasilNH2均不少于 1.1mg,KromasilNH2由于各地 苦参药材的差别较大,KromasilNH2因此暂规定:本品每片含苦参以苦参碱(C15H24N2O)计,KromasilNH2不少于 1.0mg。 在止痢宁片处方中,KromasilNH2君药为穿心莲,KromasilNH2其主要成分为穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯,KromasilNH2《中国 药典》2005 年版一部穿心莲药材就是以此成分控制穿心莲药材质量,KromasilNH2为控制止痢宁片质量 也拟测定止痢宁片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量来控制产品质量,KromasilNH2但在阴性样品试 验中,KromasilNH2在与穿心莲内酯对照品相应位置出现了严重干扰。 供试品溶液制备方法的考察:为了考察拟定供试品溶液制备方法的合理性,KromasilNH2分别取 3 份 样品,KromasilNH2精密称定,KromasilNH2按供试品溶液处理方法处理,KromasilNH2在最后用三氯甲烷萃取时分别萃取 3 次 (15、10、10ml)、4 次(15、10、10、10ml)、5 次(15、10、10、10、10),KromasilNH2测定供试 品溶液的含量,KromasilNH2结果表明,KromasilNH2萃取 3 次结果偏小,KromasilNH2而萃取 4 次和萃取 5 次结果区别不大,KromasilNH2故采用萃 取 4 次。