医药学论文：研究大黄对大鼠实验性创伤性脑水肿的影响

大黄性味苦寒，入脾胃、大肠、肝与心经，是一味传统中药。目前有研究显示，大黄对脑缺血［5］、脑出血［6］所致的细胞毒性脑水肿有明显的治疗作用。国内顾建文［7］等人通过对大黄治疗重型颅脑损伤的临床观察，证实大黄对重型颅脑损伤具有多靶点治疗作用。而其对创伤性脑水肿治疗方面的基础性研究少见报道。为此，本文采用Feeney自由落体大鼠脑外伤模型，研究大黄对大鼠脑创伤后脑水肿的影响，进一步探讨其对实验性创伤性脑水肿的防治作用和可能机制。
1.1 材料
1.1.2 主要试剂和仪器 大黄粉，由辽宁医学院附属第一医院试剂室提供；伊文氏蓝购于武汉博士德试剂公司；AQP4抗体购于美国Santa Cruz公司；SABC试剂盒购于武汉博士德试剂公司 ；自由落体打击装置；ZS-83组织匀浆机；RC5C 高速冷冻离心机；DYY-III37B等电聚焦电泳槽；JEM-1200EX透射电镜。
1.2.1 实验分组 取健康雄性成年SD大鼠（清洁级），随机分成3组：假手术组、模型组、大黄治疗组。每组分4个时间点：1、3、5、7 d，每个时间点各8只。大鼠适应性喂养3 d后用于造模。取10%水合氯醛腹腔注射麻醉（0.3 mL/100 g体重）后，将大鼠固定于立体定位仪上，行头部正中纵行切口，剥离骨膜暴露前囟和矢状缝。参考Feeney自由落体大鼠脑外伤模型，在大鼠前囟后方1.5 mm，中线右侧2.5 mm处钻开一直径为5 mm的骨洞，保持硬脑膜完整，将自由落体装置底座置于右顶部骨窗的硬脑膜表面，20 g法码从30 cm高处自由坠落至金属圆柱体表面，击中打击棒，下陷深度为0.25 cm，致大鼠中度脑损伤。用锌汀粉封闭骨窗，缝合头皮。置鼠笼喂养。其中，治疗组大鼠分别给予大黄，每天500 mg /kg灌胃。各组大鼠分别在1、3、5、7 d处死，进行指标的测量。
1.2.3 超微结构观察：将造模成功后各个时段大鼠经左心室先灌注生理盐水200 mL，然后再缓慢灌注2%戊二醛100 mL ，致右心耳流出液清亮，迅速开颅取脑，放入3%戊二醛中。经1%锇酸后固定，系列丙酮脱水，环氧树脂618 原位包埋，超薄(厚60 nm) 切片，醋酸铀染色，置于透射电镜下观察、拍片。
1.2.5 统计学方法 用SPSS 12.0 统计软件对计量数据进行分析。数据需经正态分布检验。若参数检验的假定合理，则多组间用单因素方差分析，两组间用两样本q检验。P< 0.05，P< 0.01结果具有统计学意义。
2.1 脑含水量的检测 见表1。模型组1 d创伤性大鼠脑含水量即开始上升( P< 0.05) ，3 d达到高峰;大黄组在1 、3 、5 、7 d与模型组比较差异有显著性(P< 0.05)。表1 各组大鼠在1，3，5，7 d脑含水量的检测结果*与正常对照组比较，P< 0.05 ;△与模型组比较，P< 0.05
2.3 Western印迹方法测定AQP4蛋白(见图2）表2 Western印迹各组AQP4蛋白表达灰度值假手术组模型】