- 讲师:刘萍萍 / 谢楠
- 课时:160h
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摘要: 目的 比较耐顺铂的人肺腺癌细胞(A549DDP)凋亡相关基因的表达与亲代A549细胞的差异,探讨细胞凋亡与细胞耐药的发生机制。方法 应用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片,检测A549和A549DDP细胞相关凋亡基因表达水平。结果 A549DDP细胞表达BAD、BAG3、BFAR、CARD8、CASP6、GADD45、TNFRSF14、CD70、TRADD、TRAF1、TRAF3基因较亲代A549细胞显著增高(P< 0.05),二者比值上调2倍以上。结论 肺腺癌A549DDP细胞过表达上述凋亡相关基因,可能是导致细胞凋亡受抑、细胞耐药的主要原因。
关键词: 肺癌;凋亡基因;细胞凋亡;耐药
1 对象与方法
1.2 方法
1.2.2 凋亡基因检测 按着Oligo GEArray基因芯片实验操作步骤进行(Oligo GEArray细胞凋亡基因芯片由上海康成生物科技有限公司提供)。
1.2.4 RNA质量检测 经变性琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收测定法对RNA质量进行检测。
1.2.6 芯片杂交、化学发光检测、图象采集和数据分析。
2 结 果
3 讨 论
肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)是一类新近发现的细胞内信号传导的衔接蛋白。迄今为止,已发现6种不同的TRAF (TRAF1、 TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6)。作为一种衔接蛋白,TRAFs与一些细胞表面受体直接作用,介导下游信号级联反应,调节细胞生存或死亡平衡。在6种TRAFs分子中,TRAF1、TRAF3、 TRAF5在细胞的凋亡过程中起着重要的作用。 TRAF1表达相当局限,仅存在脾、肺及睾丸中,因此,TRAF1是TRAFs分子中最有可能出现差异表达的分子之一。新近研究证实TRAF1是一种抗凋亡蛋白,TRAF1过表达抑制caspase8活化,进而抑制肺癌细胞凋亡〔2,3〕;TRAF3、TRAF5通过活化信号转导,活化泛素蛋白连接酶参与细胞凋亡调节。本研究显示A549DDP细胞表达TRAF1、TRAF3基因水平明显高于亲代A549细胞,提示TRAF1、TRAF3参与肺腺癌细胞凋亡抑制,导致细胞耐药。
责编:杨盛昌
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