医药学论文：凉血颗粒的质量标准研究

【摘要】 目的 制定成品的质量控制标准。方法 采用薄层鉴别鉴定赤芍、甘草,高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量。高效液相色谱条件:Hypersil柱(4.6nm×250nm,10μm);流动相:甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(67:173:4:4);流速:1ml/min;检测波长:230nm。结果 薄层色谱鉴别专属性好,高效液相法测定制剂中芍药苷的含量方法重现性好,准确可靠。结论 可用作为控制制剂质量的标准。

　　【关键词】 凉血颗粒;高效液相色谱;薄层色谱

　　凉血颗粒是由赤芍、甘草组成的中药制剂,具有清热凉血、散瘀止痛。该方组方简单,疗效确切,为了有效控制制剂的质量,对制剂建立质量标准。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器 Agilent1100,VWD检测器,双槽玻璃展开槽。

　　1.2 试剂 甲醇:色谱纯,美国天地(TEDIA)公司,其他试剂为分析纯。

　　2 鉴别项

　　取本品3粒内容物,加醋酸乙脂20ml,超声10min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作供试品溶液。另取甘草对照药材1g,缺甘草阴性样品适量,同法制成对照药材溶液、阴性对照液。吸取上述三种溶液各5μl,点于同一块硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(7.5:4:1)为展开剂,展开取出,晾干,喷以2%硫酸香草醛溶液(1:1),置105℃烘至斑点清晰,在供试品色谱中,在与对照药材和对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。

　　3 含量测定

　　3.1 实验条件 芍药苷对照品(中国生物制品检验所),色谱条件:色谱柱:依利特 hypersil C18(4.6nm×250nm,10μm);流动相:甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(67:173:4:4);流速:1ml/min;检测波长:230nm。

　　3.2 测定方法 对照品溶液的制备:精密称取已干燥的芍药苷对照品适量,置棕色瓶中,加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液,即得。

　　供试品溶液的制备:取本品内容物0.4g,精密称定,精密加入甲醇50ml,超声15min,称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液,即得。

　　测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪。

　　3.3 方法学考查

　　3.3.1 样品的分离度 吸取芦丁对照品溶液、赤芍药材溶液、阴性对照溶液、供试品溶液按上述方法测定,见图1~4。

　　图1 芍药苷对照品HPLC 图

　　图3 阴性对照HPLC 图图2 赤芍HPLC 图

　　图4 供试品HPLC 图

　　3.3.2 标准曲线 对照品溶液(0.311mg/ml)进样量分别为5、8、10、15μl,按试验方法项下的色谱条件测定。以量(μg)为横坐标,色谱峰的面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果表明,芍药苷在1.55~4.67μg的范围内,其进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。回归方程:Y=388.1X-6144,相关系数r=0.9995。

　　3.3.3 稳定性试验 取样品按含量测定项下的色谱条件测定其峰面积,每隔1h测1次,连续测6次,测定结果RSD=1.7%,样品在5h内测定是稳定的。

　　3.3.4 精密度试验 取对照品溶液,分别等量进样6次,按上述实验方法项下的色谱条件测定,结果表明其RSD=0.77%。

　　3.3.5 重现性试验 取样品分别为5份,按含量测定项下的方法分别测定,其RSD= 1.3%,样品测定有良好的重现性。

　　3.3.6 回收率试验 取已测定含量的供试品约0.2g, 精密称定,精密加入3.8750mg/ml芍药苷对照品2ml,按上述供试品溶液的制备方法制备和测定,一式5份,结果表1。

　　本方法测定的平均回收率为97.8%,基本符合要求。

　　4 讨论

　　赤芍的薄层鉴别,阴性对照无干扰,可作鉴别项用。甘草鉴别,已往鉴定甘草中的甘草酸铵和甘草次酸,因样品色谱干扰较大,故只用甘草药材作对照。芍药苷的含量测定方法,文献报道较多[1~3],经过对比实验,采用流动相为甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(67:173:4:4),对样品峰的分离效果最好。表1 加样回收试验结果