医药学论文：鱼腥草中抗感冒成分提取工艺的研究

【摘要】 目的：优选鱼腥草中挥发油和多糖的最佳提取工艺。方法：采用均匀设计法，以萃取率为指标，进行鱼腥草挥发油的提取工艺优选；采用正交试验法，以多糖含量为指标，对鱼腥草的多糖提取工艺进行研究。结果：鱼腥草挥发油的最佳提取方法为超临界CO2萃取法，最佳提取条件是萃取压力20MPa、萃取温度45℃、解析压力6.5MPa、解析温度50℃，鱼腥草挥发油萃取率为1.25%；多糖的最佳提取条件:热水浸提3次，每次4h，浸提温度80℃，醇沉浓度85%。结论：工艺合理，基本稳定可行。

　　【关键词】 鱼腥草 挥发油 多糖 提取工艺

　　鱼腥草又名蕺菜，为三白草科蕺菜碱属植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的全草。广泛分布于我国南方各省区，为重要的药食两用植物。目前对鱼腥草的生物活性成分进行研究取得一定进展，已发现鱼腥草含有抗菌成分鱼腥草素(即癸酰乙醛)、甲基正壬酮、月桂烯、蕺菜碱、槲皮苷等多种生物活性成分；鱼腥草水溶性多糖对葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌有不同程度的抑菌作用［１］。鉴于以上报道，笔者对鱼腥草中具有抗感冒作用的不同成分进行以下工艺研究。

　　1 仪器与材料

　　HA2215006超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司)；旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);2XZ型旋片真空汞(上海玉龙真空泵厂制造)；751G分光光度计(上海分析仪器厂)。

　　鱼腥草(全草)干品，购于吉林省宏检医药药材有限公司，经长春中医药大学中药鉴定教研室姜大成教授鉴定为正品，粉碎成20目样品；CO2为食品级；葡萄糖标准品，含量测定用，中国药品生物制品检定所；所用试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 超临界CO2萃取法提取鱼腥草挥发油 称取鱼腥草药材(20目)120g，装入1L的萃取釜内，设定流量为30～40kg/h，CO2钢瓶的压力为5MPa，按照表1设计的实验条件，超临界CO2萃取；每10min收集提取物，直至2h，称其重量，计算鱼腥草挥发油萃取率，确定最佳提取条件。结果见表1、表2。

　　将超临界萃取的实验结果输入计算机，用沈阳药科大学编写的均匀设计程序处理实验结果，得出以萃取率为指标的R=0.9908；带平方项的逐步回归方程为：Y=0.4971+0.146X2-0.233X3-0.1218X4-0.016X22+0.0016X24。 表1 超临界CO2萃取鱼腥草挥发油的均匀试验设计表水表2 鱼腥草挥发油均匀设计表及结果试验号因素ABCD萃取率%112361.20224651.12336241.25441530.95553121.20665411.17777771.25 从鱼腥草挥发油萃取率计算机分析结果可以看出鱼腥草超临界萃取较好的操作应该是：萃取压力20MPa、萃取温度45℃、解析压力6.5MPa、解析温度50℃。

　　2.2 鱼腥草多糖的提取

　　2.2.1 鱼腥草多糖含量测定方法的建立 标准曲线的测定：试验采用蒽酮浓硫酸法测定多糖的含量［1、2］。精密吸取100μg/ml葡萄糖0.20ml，0.40ml，0.60ml，0.80ml，1.00ml，分别置于25ml比色管中，用蒸馏水补充至1.00ml，摇匀，分别加入0.2%蒽酮浓硫酸试液4.00ml，迅速浸于冰水浴中冷却10min，振摇，立即置沸水浴中，自水浴中重新煮沸，准确煮沸10min，取出，用自来水冷却并在室温放置10min左右后，于625nm处比色测定，以同样的方法用1.00ml蒸馏水，加0.2蒽酮浓硫酸试液4.00ml作为空白溶液对照，进行比色，并以糖的含量作为横坐标，吸光度作为纵坐标制得标准曲线：A=8.340×10-3X-0.0406，R=0.9994。

　　总糖测定：精密称取干燥恒重的鱼腥草粗多糖0.05g，加蒸馏水定容于50ml容量瓶中，摇匀，制备样品溶液，精密量取样品溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，制成100μg/ml的待测溶液，再精密量取此液1.0ml，按"标准曲线的测定"项下的方法测定吸光度，并带入标准曲线方程计算出总多糖的含量。

　　还原糖的测定：精密量取样品溶液5.0ml，加入95%乙醇42.5ml，振摇，使多糖沉淀、过滤或离心除去沉淀，将乙醇除去后，加蒸馏水定容至50ml，摇匀。精密量取1.0ml照总糖的测定方法测定，计算还原糖含量。

　　将上述所得总糖与还原糖的量相减得多糖含量。

　　加样回收率试验：本实验采用标准加入法，精密量取总糖样品溶液1.0ml，加入葡萄糖对照液1.0ml依法测定总糖；再精密量取总糖样品溶液5.0ml，加入同样浓度的葡萄糖溶液5.0ml加95%乙醇85.0ml，依法测定还原糖，平均回收率99.1%，RSD=1.69%(n=10)。

　　2.2.2 鱼腥草多糖的提取工艺 称取经超临界提取的鱼腥草的干药材50g，按照表3设计条件，热水浸提，过滤，去滤渣，滤液浓缩，醇沉，静止15h，抽滤，沉淀溶于蒸馏水中，加热过滤，除去不溶物，醇沉，静止15h，抽滤，干燥(45℃)，得鱼腥草粗多糖。按L9(34)正交设计，见表3、表4、表5。表3 鱼腥草多糖提取因素水平表水正交试验方差分析表明，以多糖含量为指标，各因素对鱼腥草多糖提取效果的影响程度依次是A>B>D>C，A、B、D因素对鱼腥草多糖提取效果均有显著性影响，因素C无显著性差异。因此，得出鱼腥草多糖水提醇沉的最佳工艺条件为3次，4h，浸提温度为80℃，醇沉浓度为85%。

　　3 讨论

　　3.1 影响超临界CO2的因素有许多，主要有萃取压力，萃取温度，解析压力，解析温度，CO2的流量，时间，原料的粒度等，本次实验只选择了前四种因素，是由于目前我国生产的超临界CO2萃取装置存在着CO2的流量很难控制，变化范围较大。选择2h，是由于超临界CO2萃取出挥发油时间主要集中在前30min，以后萃取出的产物极少，到2h时几乎从解析釜中不能再放出挥发油。文献证明［３］，较好的粒度应为20目左右。