医药学论文：促红细胞生成素对缺氧缺血新生大鼠脑

【摘要】 目的 探讨重组人红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)、脑水肿及NO、MDA含量的影响。方法 选用7日龄Wistar大鼠80只随机分为4组，即假手术组、缺氧缺血性脑病组（即生理盐水对照组）、促红细胞生成素(rhEPO)治疗组、硫酸镁治疗组，每组各20只。后3组制备HIBD模型前30min分别腹腔内注射生理盐水、rhEPO及硫酸镁。4组动物48h后处死，随即取鼠分别给予4种处理：（1）取脑组织常规固定、切片、行H-E染色，观察脑组织的病理改变；（2）一组取脑组织精确称重后，置于恒温烤箱内48h后称干重求出脑的含水量；（3）取脑制成组织匀浆，测NO含量；（4）取脑制成组织匀浆，测MDA含量。结果 假手术组脑的含水量及NO和MDA含量均明显低于HIBD组，差异有显著性(P< 0.05)； rhEPO治疗组测定值明显低于生理盐水对照组(P< 0.05)，而与硫酸镁治疗组相比差异无显著性(P＞0.05)。结论 促红细胞生成素(rhEPO)和硫酸镁一样对脑缺氧缺血具有保护作用，可以减轻脑水肿，抑制自由基的生成。
【关键词】 鼠；缺氧缺血性脑损伤；促红细胞生成素；脑水肿；一氧化氮； 丙二醛

0.05).Conclusion rhEPO can protect the brain tissue of HIBD， relieve the cerebral edema， and inhibit the production free radical.
【Key words】 rat； hypoxic-ischemic brain damage；erythropoietin；cerebral edema；NO；MDA
围生期窒息所致的缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是引起新生儿死亡或其神经系统发育障碍的主要原因。因此，积极探索安全、合理、有效的治疗方案是当今研究的热点。笔者应用促红细胞生成素治疗HIBD动物模型，观察大鼠脑组织中一氧化氮（NO）和丙二醛(MDA)水平及其对脑水肿的影响，旨在对促红细胞生成素的作用机制作进一步探讨，并为临床治疗HIBD提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 选用健康7日龄Wistar大鼠80只，体重11～16ｇ，由哈尔滨医科大学动物实验中心提供。实验动物随机分为假手术组、生理盐水对照组、EPO治疗组、硫酸镁治疗组。每组各20只。
1.2 主要药品和试剂 重组人促红细胞生成素注射液（rhEPO）［沈阳三生制药股份有限公司生产，生产批号：国药准字（2000） 沈三生 s-01号］、硫酸镁注射液［常州市第二制药厂，生产批号：国药准字（2000）011207］、NO检测试剂盒和 MDA检测试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1.3 方法
1.3.1 模型制备 乙醚麻醉后取颈正中切口，分离并用丝线结扎右侧颈总动脉后缝合皮肤，术后恢复2h，然后置于37℃水浴且通入8％氧气和92％氮气的混合气体的密闭缺氧箱中缺氧2h，即制成缺氧缺血性脑病模型［1］。其模型检验依据脑组织的病理改变。
1.3.2 各组处理方法 假手术组只分离右侧颈总动脉，不结扎、不缺氧，亦不给予药物干预；生理盐水对照组制成模型前30min腹腔注射生理盐水0.5ml/10g；rhEPO治疗组在制成模型前30min腹腔注射rhEPO 3000u/kg；硫酸镁治疗组则给予硫酸镁100mg/kg腹腔注射。上述动物均回笼饲养，48h后断头处死，取右侧大脑半球。
1.3.3 标本的获取和结果的检测 （1）电子天平精确称量右侧大脑半球重量（湿重），将脑置于180℃恒温烤箱中烘干48h至恒重称重（干重），计算脑的含水量％＝（湿重－干重）／湿重×100％；（2）取右侧大脑半球皮质100mg，按1g∶10ml加入冰盐水作为匀浆介质，用研钵在冰水浴中研磨10min，以3000r/min的速度离心15min，取上清液，即制成10％脑组织匀浆。NO含量用硝酸还原酶法测定，MDA含量用改良的硫代巴比妥酸法测定。匀浆蛋白含量用双缩脲法测定。严格按照使用说明操作；（3）取右侧大脑半球，10％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，切取中级至视交叉处组织脑组织切片(6μm)，H-E染色，观察病理学改变。
1.4 统计学分析 采用方差分析，所得数据以均数±标准差（x±s）表示，以P＜0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 病理改变 (1)假手术组：外观显示大鼠脑膜血管无扩张，脑组织无水肿。光镜下显示脑各部位结构及层次清楚，细胞形态结构清晰完整。(2) 生理盐水对照组：肉眼见大鼠脑膜血管中度扩张，组织极度水肿。镜下显示脑各部位结构及层次紊乱，细胞水肿明显，毛细血管周围间隙增宽，神经纤维疏松。部分神经细胞固缩、细胞质深染，提示神经元变性；部分细胞嗜酸变性提示细胞坏死。（3）两干预组：外观显示大鼠脑膜血管轻度扩张，脑组织轻度水肿。光镜下显示脑各部位结构及层次较生理盐水对照组清楚，细胞轻度水肿。神经元变性及脱失较生理盐水对照组减轻。
2.2 各组脑组织含水量 与假手术组比较，生理盐水对照组脑含水量明显增加（P< 0.05） ，EPO治疗组与生理盐水对照组比较，脑含水量明显减少（P< 0.05），EPO治疗组和硫酸镁治疗组二者差异无显著性（P＞0.05）。