医药学论文：神经肽Y与去甲肾上腺素促心肌细胞肥大效应

【摘要】 目的 观察神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）与去甲肾上腺素(NE)对心肌细胞生长、细胞内蛋白质合成的影响及二者的相互作用。方法 进行原代乳鼠心肌细胞培养，以3H-亮氨酸掺入率的变化来反映NPY、NE对心肌细胞内蛋白质合成的影响。结果 (1)NPY组、NE组3H-亮氨酸掺入率显著高于对照组（P< 0.01）；(2)NPY与NE合用可使心肌细胞3H-亮氨酸掺入率进一步升高，与二者单独使用组相比差异有非常显著性（P< 0.01）。结论 (1)NPY、NE均可促进心肌细胞内蛋白质的合成；(2)NPY与NE在促进心肌细胞内蛋白质合成过程中有明显的协同效应。
【关键词】 神经肽Y；去甲肾上腺素；心肌细胞肥大
【Abstract】 Objective To investigate the effects of NPY and NE on cellular hypertrophy in cardiomyocytes，and conclusions were wished be uesful theoretic guides for clinical therapy.Methods Neonatal Wistar rat's cardiomyocytes were cultured first，then the effects of NPY，NE on cardiomyocytes growth were observed by measuring the changes of the 3H-Leucine incorporation ratio in different concentrations and different times.Results (1)The 3H-Leucine incorporation ratios were significantly higher in NPY and NE group than in control(P< 0.01)；(2)The 3H-Leucine incorporation ratios of NPY+NE group were significantly higher than NPY and NE group(P< 0.01).Conclusion (1)NPY and NE could induce the hypertrophy of cardiomyocytes；(2)Being factors which were co-secreted from sympathetic nerves， NPY and NE woked in coordination with each other in cardiomyocytes growth.
【Key words】 cardiomyocyte hypertrophy；neuropeptide Y；NE
神经肽Y（NPY）是1982年从猪脑中提取出来的一种含36个氨基酸的多肽，为非肾上腺非胆碱类神经分泌的递质，具有显著的心血管活性［1］。本实验采用培养的心肌细胞为模型，以NPY为直接刺激因素，排除了完整心脏研究中心肌继发性缺血和心脏内其它递质的影响，直接观察NPY对心肌细胞生长的影响。
1 材料与方法
1.1 主要材料与试剂 M199培养基（美国Hyclon公司），胰蛋白酶（华美生物工程公司），神经肽Y（美国Sigma公司），去甲肾上腺素（上海禾丰制药有限公司），3H-亮氨酸（中国原子能研究所）：放射线浓度1mCi/ml，铅瓶4℃储存，临用前用去离子水配成所需浓度。 液体闪烁液：称取PPO 4g，POPOP 0.4g，溶于1000ml AR级甲苯中，再加入570ml无水乙醇，充分混合。
1.2 乳鼠心肌细胞培养与鉴定［2］ 出生3天之内的Wistar乳鼠（由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供），培养乳鼠心肌细胞并用α-Actin免疫组化及电镜鉴定。
1.3 分组处理及3H-亮氨酸掺入率测定 按文献方法［3］，略加改进。
将原代消化所得并经过纯化的心肌细胞密度调整至约3.0×106/ml，接种于24孔培养板，每孔1ml，48h后换为无血清培养液，加干预因素及3H-亮氨酸0.5μCi/孔，分为7组：Control对照组、NPY10-9M终浓度组、NPY10-8M终浓度组、NPY10-7M终浓度组、NPY10-6M终浓度组、NE10-7M终浓度组、NE10-7M+NPY10-7M终浓度组。每组n＝6。每24h更换一次培养液，按实验规定的时间培养后，加0.25%胰蛋白酶0.3ml/孔消化细胞，血球计数板计数，在负压吸引器上将细胞转至49型玻璃纤维滤纸，PBS 5ml×2次冲洗滤纸，以洗去游离的3H-亮氨酸，10%三氯醋酸破碎细胞并固定于膜上，80℃30min烤干滤纸，置5ml液闪杯中，静置平衡过夜，LS-6500型液体闪烁计数仪测定cpm值，以cpm/105细胞表示3H-亮氨酸的掺入率。
1.4 统计学处理 所有数据以均值±标准差（x±s）表示，应用Eztate2统计软件进行方差分析、t检验。结果以P< 0.05为相差显著，P< 0.01为相差非常显著。
2 结果
2.1 NPY作用浓度与3H-亮氨酸掺入率的关系 见图1。当NPY浓度为10-9M时，3H-亮氨酸掺入率即明显增加，与对照组相比差异有显著性（P< 0.05），随着NPY浓度的提高，3H-亮氨酸掺入率呈剂量依赖性地增加，到10-7M浓度时基本稳定（图1）。
2.2 NPY作用时间与3H-亮氨酸掺入率的关系 见图2。NPY促进3H-亮氨酸掺入率增加的作用在一定范围内随时间延长而增强，在10-8M浓度下作用下24h，3H-亮氨酸掺入率即比对照组增加2倍，差异有非常显著性（P< 0.01），其时间-效应曲线如图2所示。
2.3 不同刺激因素对心肌细胞3H-亮氨酸掺入率比较 见图3。(1)NE10-7M使心肌细胞3H-亮氨酸掺入率明显增加，与对照组相比差异有非常显著性(P< 0.01)，见图3。(2)NPY10-7M与NE10-7M合用时，心肌细胞3H-亮氨酸掺入率进一步增加，与NPY10-7M组、NE10-7M组相比差异均有非常显著性(P< 0.01)，见图3。