医药学论文：胃癌组织中SOX4基因的突变分析

【摘要】 目的 研究胃癌中SOX4基因的碱基及其编码的氨基酸突变情况，探讨其在胃癌发生中的作用。方法 提取胃癌肿瘤及癌旁组织的DNA， PCR扩增胃癌SOX4基因的HMG－box框，并对其进行PCR-SSCP分析，对有差异的样本进行DNA测序。将测序结果用ClustalX软件与正常的HMG－box框序列比对，用DNAStar软件将HMG－box框碱基序列转化成氨基酸序列，再用ClustalX软件与正常的氨基酸序列比对。结果 经序列测定发现在27例胃癌样本中有12例出现点突变，而在癌旁组织中没有发现突变，晚期胃癌的突变率明显高于早期胃癌。结论 SOX4基因突变可能与胃癌的发展和转移有相关性。本研究为探索SOX4基因突变与人类肿瘤发生之间的关系提供了分子资料。
【关键词】 胃癌；SOX4；HMG－box；突变
The mutation and sequence analysis of SOX4 in gastric carcinoma
【Abstract】 Objective To investigate the mutation of SOX4 HMG-box in gastric carcinoma tissues and to explore its roles in progression of gastric carcinoma.Methods The DNA of gastric carcinoma tissues and gastric mucosa tissues were extracted. HMG-BOX of SOX4 gene was amplified by PCR. After PCR-SSCP analyzing ， the different samples were sequenced ，and translated into peptide ，then analyzed by ClustalX software.Results 12 out of 27 gastric carcinoma samples have mutations，no mutations have been detected in the paracancerous tissues，mutation rate is higher in terminal stomach cancer than in early stomach cancer.Conclusion This suggests SOX4 gene mutations have some relation with the happening of gastric carcinoma. This study gives some molecular information for further research of the relationship between SOX4 gene mutation and human cancer.
【Key words】 gastric carcinoma；SOX4；HMG-box；mutation
SOX基因是以SRY基因为基本成员的一类新的控制发育的基因家族［1］，在个体发育过程中对性别分化及组织器官形成起重要作用，主要特征为具有一个保守基序HMG-box，可与DNA序列特异结合，是一类重要的转录调控因子［2］。现阶段这方面的研究表明， SOX基因在早期胚胎发育过程中参与多种发育途径，具有重要的作用，参与诸如性别决定、骨组织的发育、血细胞生成过程、神经系统的发育、晶状体的发育等多种早期胚胎发育过程［3］，故人类SOX基因的突变或缺失会导致发育异常和严重的先天性疾病［4～9］。因此，对SOX基因的研究不仅可以揭示性别分化和胚胎发育的机制，而且可为某些疾病的诊断和治疗提供分子方向的资料，有着非常重要的理论和应用价值。
胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。在中国北方，胃癌死亡率占所有恶性肿瘤死亡率的第一位［10］。本文在对胃癌组织DNA的SOX4基因进行PCR－SSCP分析时发现，部分病例发生了点突变，导致氨基酸序列发生变化。提示SOX4基因突变或异常表达与消化道肿瘤的发生、发展具有相关性。
1 材料与方法
1.1 材料来源 27例新鲜胃癌手术切除标本均取自弋矶山医院外科手术室，其中Ⅰ期8例，Ⅱ期9例，Ⅲ期10例，均未经化疗或放射性治疗，每例标本包括原发癌肿和距肿瘤边缘5cm以上的癌旁组织作为对照。经镜检，原发癌肿癌细胞在70%以上，癌旁组织无癌细胞。标本置于细胞冷藏袋中－80℃保存。
1.2 基因组DNA提取 用酚/氯仿法提取基因组DNA［11］。
1.3 主要试剂和仪器 蛋白酶K 、TaqDNA聚合酶（5U/μl）、10×Buffer、MgCl2，dNTP均购于Promega公司。PTC-100 PCR仪(MJ Research company)、电泳仪（北京六一仪器厂）、水平板电泳槽（北京六一仪器厂）、TGL-16高速台式离心机、DU70紫外分光光度计（美国Beckman公司）、TLL－C台式冷冻离心机（军事医学科学院实验仪器厂）。
1.4 DNA的定量 DNA完全溶解后，吸取5μl DNA溶液，加95μl TE，稀释100倍，在DU70紫外分光光度计上测定OD260及OD280值。1OD260 值相当于50μg/ml的双链DNA，所以DNA浓度为OD260×50μg/ml×100（稀释倍数），纯度依据OD260/OD280 比值，小于1.8，说明有蛋白质污染；大于2.0说明有RNA污染。最佳值在1.8～2.0之间。经测定所提取的DNA均符合要求。