医药学论文：大豆小分子肽抗氧化效应的初步研究

【摘要】 目的通过动物实验来初步探讨大豆小分子肽（分子量300~700Da）的抗氧化作用。方法 采用昆明种小鼠，实验组小鼠分低、中、高［3.0g/（kg·d）、 6.0g/（kg·d）、9.0g/（kg·d ）］三个剂量组灌胃大豆小分子肽25天，测定小鼠耐缺氧能力的影响。老年雄性Wistar大鼠20只，随机分为老年对照组10只，老年实验组10只，老年实验组灌服大豆小分子肽，按6.0g/（kg·d）剂量，老年对照组灌服同体积的生理盐水。第60天末取样测定血红细胞和肝脏中丙二醛含量和超氧化物歧化酶(superoxide dimutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性。结果 大豆小分子肽实验组中的高剂量组与对照组（生理盐水组）相比（小白鼠死亡只数），耐低压缺氧能力增强，老年实验组与老年对照组比较，血红细胞SOD酶活性升高(P< 0.05)，肝脏组织SOD酶活性有升高的趋势，但无统计学意义(P>0.05) 。血红细胞与肝脏组织丙二醛含量有减低趋势，但无统计学意义(P>0.05)；GSH-Px酶活性升高(P< 0.05)。结论 大豆小分子肽（分子量300~700Da）具有一定的提高老龄大鼠体内抗氧化酶活性、抑制脂质过氧化的作用。
【关键词】 大豆小分子肽；抗氧化；耐缺氧能力；SOD 丙二醛；GSH-Px
Preliminary study on anti-oxidative capability of soybeanminor peptides

0 05)，and theconcentrations of MDA in Hb and liver had also a increase tendency，but without any significant difference(P>0.05).As compared with those incontrol the the activities of GSH-px had a increase tendency，(P< 0.0 5).Conclusion Soybean minor peptides（MW300~700Da）have the tendencyin increasing the activity of antioxidant enzymes and decreasing lipid peroxidation．
【Key words】 soybean；minor peptides；anti-oxidation；bear anoxia ability；SOD，GSH-Px；MDA
在20世纪4O年代，一些西方学者用酶法改性蛋白质来补充极其缺乏的动物蛋白质，当时由于技术水平的限制，大豆肽的研究无多大进展。到6O年代末，随着生物技术的进步和生命科学的发展，生理活性肽的生理功能逐步被人们发现，并受到越来越多的重视，尤其是一些活性肽的结构和生理功能逐渐明确，推动了活性肽的研究，也促进了大豆肽的研究与开发［1］。
大豆多肽是大豆蛋白质的水解产物，能有效刺激甲状腺激素分泌，促使胆固醇代谢生成胆汁酸。胆汁酸又被食物纤维所吸附，排出体外从而阻碍对胆固醇的吸收，起到降低胆固醇作用。我国于20世纪80年代中后期开始了大豆多肽的研究。目前在大豆多肽的研究与开发中存在的主要问题是大豆多肽与生理功能的关系［2］。大豆小分子肽的抗氧化以及抗衰老作用仅见体外实验报道，而动物体内实验尚少见报道。本实验是用我们实验室自己研制的大豆小分子肽，通过动物实验模型来探讨其抗氧化的作用，为更好地开发大豆小分子肽提供初步的理论依据。
1 材料与方法
1.1 原料及处理 大豆小分子肽的生产工艺：脱脂大豆饼→水提取→豆乳→粗胰酶预酶解→酶解乳→中性蛋白酶水解→酶解液→分离→大豆多肽→脱色→脱盐超滤→大豆小分子多肽液经浓缩→喷雾干燥→大豆小分子肽粉→用去离子水配成透明溶液以备灌胃用。该工艺制成大豆小分子肽采用高效凝胶过滤色谱法（HPGFC）测定：小分子多肽峰值分子量范围为300~700Da之间。
1.2实验动物 实验动物昆明种小白鼠由本学院实验动物中心提供。Wistar种老龄大白鼠由沈阳药检所提供。昆明种小白鼠80只，雌雄各半，体重（18±2）g，按性别、体重随机分为1个对照组和3个试验组。分组后饲养观察3天，剔除不合格个体后灌胃，空白对照组灌胃适量生理盐水，各实验组灌胃大豆小分子肽溶液，剂量分别为每天3.0g/kg、6.0g/kg、9.0g/kg。连续25天，实验期间，小鼠自由摄食及饮水［3］。取鼠龄为20个月，体重为（381.75±39.23）g，Wistar老龄雄性大白鼠20只，按体重随机分为1个对照组和1个实验组。分组后饲养观察3天后灌胃，对照组灌胃生理盐水5ml/d，试验组灌胃大豆小分子肽溶液 6.0g/(kg·d）。饲养60天，实验期间，大鼠自由摄食及饮水［4］。
1.3低压缺氧状态的影响组小鼠连续给样第25天后，于末次给样后2h将小白鼠放入减压至负压80mmHg，持续时间为5min，记录小白鼠死亡只数［5］。
1.4 对大白鼠各组SOD、GSH-Px活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响［6］ 大鼠连续给样60天后，分别剪断股动脉，血用肝素抗凝，取肝脏用冰生理盐水冲洗，滤纸吸干，精确称重，加入冰生理盐水，玻璃匀浆器制成10％的组织匀浆，离心后吸取上清液备用。按微量邻苯三酚快速测定红细胞，肝脏的SOD活性。而GSH-Px活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量测定采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒。
1.5 统计学处理 所有数据输入计算机，用SPSS 10.0 For Windows统计软件进行单因素方差分析，统计处理数据用x±s表示。组间比较用t检验，显著性水平为P< 0.05。
2 结果
2.1 大豆小分子肽对低压缺氧的影响 大豆小分子肽实验组中的高剂量组与对照组（生理盐水组）相比（小白鼠死亡只数），耐低压缺氧能力是否明显增强，差异有显著性（P＜0.05）。见表1。
2.2 大豆小分子肽对老年大白鼠SOD活性的影响 大豆小分子肽实验组与对照组相比，实验组的红细胞（Hb）SOD活性显著增加(P< 0.05)，而肝脏的SOD活性有增加趋势，但两组没有统计学意义(P>0.05)。见表2。