解放军文职招聘考试生物化学试题及答案18

 生物化学试题及答案
一、名词解释：
1.         基因工程（genetic engineering）。
2.         接合作用 (conjugation )。
3.         转化作用 (transforation )。
4.         转导作用 (transduction )。
5.         转座 (transposition )。
6.         转座子 (transposons )。
7.         同源重组 (homologous recombination )。
8.         基本重组 (general recombination )。
9.         DNA克隆 （DNA cloning ）。
10.      复制子 ( replicon )。
11.      限制性核酸内切酶 (restriction endonuclease )。
12.      回文结构 （palindrome ）。
13.      配伍末端 （compatible end ）。
14.      目的DNA （target DNA）。
15.      互补DNA  (complementary DNA；cDNA )。
16.      克隆载体 (cloning vector )。
17.      表达载体 (expression vector )。
18.      质粒 (plasmid )。
19.      α—互补 (alpha complementation )。
20.      基因组DNA文库 ( genomic DNA library )。
21.      标志补救 (marker rescue )。
22.      转染 （transfection ）。
23.      基因组DNA （genomic DNA）。
24.      感受态细胞 （competent cell ）。
25.      聚合酶链反应 (polymerase chain reaction )。
26.      cDNA文库 (cDNA library )。
27.      保守性转座 (conservative transposition )。
28.      复制性转座 (duplicative transposition )。
29.      溶菌生长途径 (lysis pathway )。
30.      溶源生长途径 (lysogenic pathway)。
二、填空题：
31.      自然界的常见基因转移方式有____ 、____ 、____ 、____。
32.      不同DNA分子间发生的共价连接称为____有____ 、____两种方式。
33.      某些基因可以从一个位置移动到另一个位置，这些可移动的DNA序列包括____和____。
34.      由___和___介导的基因移位或重排称为转座。
35.      反转录病毒整合酶可特异地识别．整合反转录病毒的cDNA的____，转座酶可特异识别转座子的____，发生特异性整合。
36.      基因工程的载体必须具备的条件有____ 、____ 、____。
37.      限制性内切核酸酶识别的核苷酸序列的个数为____、____和____，其切口有____端和____端。
38.      基因工程常用的载体DNA分子有____ 、____．和____。
39.      一个完整的DNA克隆过程应包括____ 、____ 、____ 、____ 、____。
40.      目的基因获取的途径或来源有____ 、____ 、____ 、____。
41.      基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有____ 、____ 、____。
42.      基因克隆的原核表达体系的E,coli表达体系的表达载体应符合的标准有：____ 、____ 、____ 、____。
43.      基因克隆真核生物表达体系常见的有____ 、____ 、____表达体系。
44.      根据重组体DNA的性质不同，将重组体DNA导入受体细胞的方式有____ 、____ 、____等。
45.      M13噬菌体基因间隔区插入E,coli的一段调节基因及___的N端___个氨基酸残基的编码基因，其编码产物为______的α片段，突变型lac- E,coli可表达该酶的ω片段。当宿主细胞与克隆载体同时表达两个片段时，宿主细胞可使特异的作用物变为兰色化合物，即称为____。
46.      如果M13的外源基因被插入到lac Z 基因内，则在含有X—gal的培养基上生长时会出现____色菌落，如果在lac Z基因内无外源基因插入，在同样的条件下呈现____色菌落。
47.      典型的插入序列是由____序列和一个____编码基因构成。
48.      插入序列发生的转座有____和____两种形式。
49.      当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，____就可以从一个细胞（细菌）转移到另一细胞（细菌），这种类型的DNA转移称为____作用。
50.      重组DNA技术中常用的工具酶有____、____、____、____。
三、选择题：
    A型题
51.      关于接合作用正确的是
A．与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，染色体DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）
B．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，某些较大质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）
C．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，噬菌体DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）
D．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，所有类型的质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）
E．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，所有类型的噬菌体DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）
52.  下列那种方式保证了免疫球蛋白的多样性？
A．转化                                             B．转染                
C．转位                                             D．转导          
E．接合
53.  微切割技术使目的基因可来源于下列那种物资？
A．真核细胞染色体DNA                              B．人工合成DNA．       
C．CDNA                                           D．G—文库        
E．C—文库
54.  基因工程的特点是：
A．在分子水平上操作，在分子水平上表达                  B．在分子水平上操作，在细胞水平上表达
C．在细胞水平上操作，在分子水平上表达                  D．在细胞水平上操作，在细胞水平上表达
E．以上均可以
55.  实验室内常用的连接外源性DNA和载体DNA的酶是：
A．DNA连接酶                                      B．DNA聚合酶Ⅰ      
C．DNA聚合酶Ⅱ                                    D．DNA聚合酶Ⅲ    
E．反转录酶
56．用来鉴定DNA的技术是：
A．Northern印迹                                     B．Southern印迹        
C．Western印迹                                      D．亲和层析         
E．离子交换层析
57．用来鉴定DNA的技术是：
A．Northern印迹                                     B．Southern印迹
C．Western印迹                                      D．亲和层析
E．离子交换层析
58．重组DNA技术中常用的工具酶下列那项不是：
A．限制性核酸内切酶                                B．DNA连接酶
C．DNA聚合酶Ⅰ                                   D．RNA聚合酶
E．反转录酶
59．F- 细胞与F+细胞混合培养，产生F+细胞的过程为：
A．转化                                            B．转导
C．接合                                            D．突变
E．转位
60．DNA致癌病毒感染宿主细胞后，使之发生癌变是因为发生了：
A．转化                                            B．转导
C．接合                                            D．转座
E．转位
61．关于基因工程的叙述，不正确的是：
A．根据实验目的选择目的基因                        B．选择一个适合的载体
C．把目的基因和载体分别用限制性核酸内切酶切开      D．连接酶只连接目的基因和载体
E．把重组体转化到细胞中去的过程不是绝对的
62．限制性核酸内切酶不具有那项特点：
A．仅存在原核细胞中                                B．用于重组DNA技术中的为Ⅰ类酶
C．能识别双链DNA中特定的碱基顺序                 D．具有一定的外切酶活性
E．辨认的核苷酸序列常具有回文结构
63．限制性核酸内切酶识别DNA中核苷酸序列的个数为：
A．4、5、6                                         B． 5、6、7
C． 6、7、8                                        D．4、6、8
E． 4~8
64．如果某限制性核酸内切酶识别的碱基序列为6个，则24Kb的一段随机的DNA序列可出现的切口数为：
A．4次                                             B．5次
C．6次                                             D．7次
E．8次
65．关于限制性核酸内切酶的叙述，下列那项是错误的：
A．限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为Ⅱ酶   B．限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端
C．识别的核苷酸序列个数可以是6个或8个             D．识别的序列一般具有回文结构
E．识别的DNA为单链
66．关于基因工程的叙述，下列那项是错误的？
A．基因工程也称基因克隆                             B．只有质粒DNA可作为载体
C．重组体DNA转化或转染宿主细胞                    D．需获得目的基因
E．需对重组DNA进行纯化．筛选
67．有关质粒的叙述，下列那项是错误的？
A.                小型环状双链DNA分子                          B．可小到2~3Kb ，大到数百个Kb
C．能在宿主细胞中独立自主地进行复制                D．常含有耐药基因
E．只有一种限制性核酸内切酶切口
68．有关质粒的叙述，下列那项是错误的？
A．质粒的某些遗传信息可赋予宿主细胞                B．质粒较易转化
C．质粒的遗传表型可作为转化子的筛选依据            D．PBR322的分子中仅有一个E．coRⅠ内切酶位点                                            
E．PBR322含有β—半乳糖苷酶的α片段基因
69．有关噬菌体的叙述错误的是：
A.           常用作克隆载体的噬菌体有λ—噬菌体和M13噬菌体  B．λ噬菌体DNA改造成的载体有λgt系列和EMBL系列
C．λgt系列适用于插入型载体，用于cDNA克隆        D．EMBL系列适用于置换型载体，用于基因组DNA克隆
E．M13噬菌体基因间隔区插入了E．coli的一段调节基因和LacZ的C端氨基酸编码基因
70．下列那项不是重组DNA的连接方式
A．粘性末端与粘性末端的连接                        B．平端与平端的连接
C．粘性末端与平端的连接                            D．人工接头连接
E．同聚物加尾连接
71．关于翻译，下列那项不正确？
A．重组体由目的基因与载体连接组成                  B．重组体能转化细胞
C．重组体的表达在细胞水平                          D．重组体有独立繁殖的能力
E．重组体的表达体系有真核和原核两种
72．关于基因重组的叙述，错误的是：
A．整段的DNA不能在细胞内进行交换                 B．整段的DNA能在细胞内进行交换
C．整段的DNA能在不同的物种间进行交换             D．交换的DNA能在新的位置上进行复制．转录．翻译
E．基因重组可引起自然突变现象
73．基因重组的方式不包括：
A．转化                                            B．转导
C．转位                                            D．转换
E．整合
74．关于噬菌体错误的是；
A. λ噬菌体DNA进入宿主菌后可整合到宿主菌DNA中又可保持独立状态
B．依赖本身的酶系进行其DNA的复制
C．依赖宿主的酶系进行其DNA的转录
D．依赖宿主的酶系表达其蛋白质外壳
E．当λ噬菌体从宿主细胞释放出来，再感染另外的宿主时，可发生转导作用
75．有关噬菌体的叙述那项不符合：
A．感染大肠杆菌时仅把DNA注入大肠杆菌内          
B．有溶源和裂解两种生活方式
C．溶源和裂解两种生活方式可以相互转变             
D．噬菌体是由外壳蛋白和DNA组装而成
E．当从一个宿主细胞释放出来，再感染另外宿主时，一定发生转导作用
76．DNA克隆不包括下列那项步骤？
A．选择一个适合的载体                             
B．限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的基因
C．用连接酶连接载体DNA和目的DNA，形成重组体   
D．用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌
E．重组体用融合法导入细胞
77．下列那项不能作为表达载体导入真核细胞的方法？
A．磷酸钙转染                                      B．电穿孔
C．脂质体转染                                      D．显微注射
E．氯化钙转染
78．下列那项不能作为基因工程重组体的筛选方法
A ．抗药性标志选择                                 B．宿主菌的营养缺陷标志补救
C．原位杂交                                           D．Southern印迹PCR技术
79．下列那项不是重组体筛选的免疫化学方法的工作原理及特点：
A.   将琼脂培养板上的转化子菌落经蒸汽裂解释放抗原
B.   将固定目的基因编码蛋白质的抗血清聚乙烯薄膜覆盖在裂解菌落上
C.   再使用32P标记的DNA探针与薄膜反应
D.   经放射自显影检出阳性反应菌落
E．免疫学方法特异性强．灵敏度高，尤其适用于选择不为宿主菌提供任何选择标志的基因
80．重组DNA技术不能应用于：
A．疾病基因的发现                                B．生物制药
C．DNA序列分析                                 D．基因诊断
E．基因治疗
81．基因重组是指DNA分子的：
A．共价连接                                      B．氢键连接
C．离子键连接                                    D．交换
E．退火
82．下列那种药物不能用基因工程的方法生产？
A．胰岛素                                        B．干扰素
C．白细胞介素                                    D．性激素
E．促红细胞生成素
83．DNA重组技术不能应用于下列哪个方面？
A.   产前诊断                                      B．携带者测试
C．症候前诊断                                   D．遗传病的易感性
E．传染病的传染性
84．一种可靠的DNA诊断学方法，下列那项是不必符合的？
A．能正确扩增靶基因                             B．能准确区分单个碱基的差别
C．本底或噪声低，不干扰DNA的鉴定              D．便于完全自动化操作
E．方法简便，易于推广应用
85．关于转化错误的是：
A．受体细胞获得新的遗传表型                    
B．外源DNA一定整合进受体细胞基因组
C．自然界中较大的外源DNA转化几率较低         
D．自然界中较大的外源DNA转化几率较高
E．越大的外源DNA与染色体整合几率越低
86．关于同源重组不正确的是：
A．同源重组不需要特异的DNA序列               
B．同源重组要求两分子间序列必须相同
C．RecB．C．D具有内切酶和解旋酶活性            
D．Holliday中间体的形成，是同源重组的重要步骤
E．需要DNA连接酶参与
87．下列那种酶是重组DNA技术中最重要的？
A．反转录酶                                    B．碱性磷酸酶
C．末端转移酶                                  D．DNA聚合酶Ⅰ
E．DNA连接酶
88．在分子生物学中，基因克隆主要指：
A．DNA的复制                                 B．DNA的转录
C．DNA的剪切                                 D．RNA的转录
E．RNA的剪接
89．在分子生物学中，重组DNA又称为：
A．酶工程                                     B．蛋白质工程
C．细胞工程                                   D．基因工程
E．DNA工程
90．基因工程中，不常用到的酶是；
A．限制性核酸内切酶                           B．DNA聚合酶
C．DNA连接酶                                D．逆转录酶
E．DNA解链酶
91．限制性核酸内切酶酶切后的DNA末端最常见的是：
A．平头末端                                   B．3’突出末端
C．5’突出末端                                 D．粘性末端
E．缺口末端
92．能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为：
A．DNA内切酶                                 B．限制性内切核酸酶
C．非限制性内切核酸酶                         D．限制性外切核酸酶
E．非限制性外切核酸酶
93．cDNA是指：
A．在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA     
B．在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA
C．在体外经反转录合成的与RNA互补的RNA     
D．在体内经反转录合成的与RNA互补的RNA
E．在体内经反转录合成的与RNA互补的DNA
94．基因工程中通常使用的质粒存在于：
A．细菌染色体                                 B．酵母染色体
C．细菌染色体外                               D．酵母染色体外
E．以上均不是
95．质粒的分子结构是：
A．环状双链DNA                              B．环状单链DNA
C．环状单链RNA                              D．线状双链DNA
E．线状单链DNA
96．聚合酶链反应常常缩写为：
A．PRC                                       B．PER
C．PDR                                       D．BCR
E．PCR
97．在已知DNA序列的情况下，获取目的基因的最方便的方法是：
A．人工化学合成                               B．基因组文库法
C．cDNA文库法                               D．PCR法
E．从染色体DNA直接提取
98．E．coRⅠ切割DNA双链产生：
A．平端                                       B．5’突出的粘性末端
C．3’突出的粘性末端                           D．钝性末端
E．配伍末端
99．用于PCR反应的酶是：
A．DNA连接酶                                B．碱性磷酸酶
C．逆转录酶                                   D．限制性内切核酸酶
E．Taq DNA聚合酶
100．PstⅠ内切酶切割目的基因后产生：
A．   5′ ——G ↓A A T T  C ——3′      
B．    5′ ——G T T↓ A A  C ——3′

            3′ ——C   T T A A↑G ——5′              3′——C A A ↑ T T  G ——5′
      C．   5′——C T G C A↓ G ——3′

D．  5′ ——C T G↓ C A G ——3′
 
3′——G↑ A C G T C ——5′                3′ ——G A C↑ G T C ——5′
      E．   5′ ——G A A ↓T T  C ——3′   
3′ ——C T T ↑A A  G ——5′ 
101．将PstⅠ切割后的目的基因与同样切割的载体DNA连接是：
A．同聚物加尾连接                            B．人工接头连接
C．平端连接                                  D．粘性末端连接
E．非粘性末端连接
102．限制性核酸内切酶切割DNA后产生：
A．3’磷酸末端和5’羟基末端                    B．5’磷酸末端和3’羟基末端
C．3’磷酸末端和5’磷酸末端                    D．3’羟基末端和5’羟基末端
E．3’羟基末端．5’羟基末端和磷酸
103．基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是：
A．DNA聚合酶                               B．RNA聚合酶
C．DNA连接酶                               D．RNA连接酶
E．限制性核酸内切酶
104．以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称为：
A．转化                                     B．转染
C．转导                                     D．转位
E．感染
105．最常用的筛选转化细菌是否含有质粒的方法是：
A．营养互补筛选                             B．抗药性筛选
C．免疫化学筛选                             D．原位杂交筛选
E．Southern印迹筛选
106．α互补筛选属于：
A．抗药性标志筛选                          B．酶联免疫筛选
C．标志补救筛选                            D．原位杂交筛选
E．免疫化学筛选
107．进行同聚物加尾法连接目的基因和载体DNA时，需要那种酶？
A．DNA聚合酶                             B．RNA聚合酶
C．引物酶                                 D．逆转录酶
E．末端转移酶
108．确切的讲，cDNA文库包含：
A．一个物种的全部基因信息                 B．一个物种的全部RNA信息
C．一个生物体组织或细胞的全部基因信息     D．一个生物体组织或细胞的全部RNA信息
E．一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息
109．下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是：
A．小型环状双链DNA分子                  B．携带有某些耐药基因
C．在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞       D．具有自我复制能力
E．获得目的基因
110．表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：
A．E．coli表达体系                          B．原核表达体系
C．酵母表达体系                            D．昆虫表达体系
E．哺乳类细胞表达体系
B型题：
(111~113)
A．噬菌体感染宿主菌后核酸进入菌体的过程   B．外来DNA引起生物类型改变的过程
C．溶源菌中的噬菌体全部基因都表达         D．溶源菌中的噬菌体部分调控区的基因表达
E．带有宿主DNA的噬菌体
111．溶源状态是： 
112．进入裂解周期是： 
113．转导噬菌体是指： 
(114~116)
A．接合作用                               B．转化作用
C．转导作用                               D．转座作用
E．转移作用
114．F因子阴性细胞与F因子阳性细胞形成F因子阳性细胞的是： 
115．病毒从被感染的细胞释放出来，再次感染另一细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移的是： 
116．从一个染色体位点转移至另一位点的分散的重复序列称为： 
(117~120)
A．插入序列转座                          B．转座子转座
C．位点特异的重组                        D．同源重组
E．溶源
117．噬菌体DNA和宿主染色体的特异靶位点整合称为： 
118．噬菌体的生长方式是： 
119．Tn3发生的DNA转移的是： 
120．复制后的一个复制本迁移至新位，另一个仍保留在原位的是： 
    (121~123)
A．Rec A                                B．E．coRⅠ
C．Ruv C                                D．Lex A
E．F factor
121．有蛋白水解酶活性的是： 
122．能使同源重组中单链DNA对另一双链DNA的侵入的是： 
123．切割Holliday中间体的内切酶是： 
(124~126)
A．Replicon                              B．Cloning
C．Inverted repeats                        D．Palindrome
E．Transposons
124．目的基因与载体连接形成： 
125．来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合称为： 
126．限制性内切核酸酶识别的序列具有： 
(127~129)
A．抗药性筛选                           B．分子杂交筛选
C．RNA反转录                           D．免疫学方法
E．体外翻译
127．用于鉴定质粒是否转化的一般方法是： 
128．用于鉴定转化子细胞是否含有目的基因的常用方法是： 
129．利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含有目的基因的转化子细胞的方法是： 
(130~132)
A．限制性核酸内切酶                     B．DNA连接酶
C．反转录酶                             D．Taq DNA聚合酶
E．碱性磷酸酶
130．识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是： 
131．用于PCR反应的酶是： 
132．将目的基因与载体进行拼接的酶是： 
(133~134)
A．支原体                               B．衣原体
C．噬菌体                               D．细菌
E．酵母
133．常用于原核表达体系的是： 
134．常用于真核表达体系的是： 
(135~137)
A．转染                                 B．转化
C．感染                                 D．转导
E．转位
135．以质粒为载体，细菌为宿主的导入方式是： 
136．以噬菌体为载体，细菌为宿主的导入方式是： 
137．以病毒为载体，哺乳动物细胞为宿主的导入方式是： 
(138~139)
A．抗药性筛选                           B．RNA反转录
C．免疫化学方法                         D．体外翻译
E．PCR
138．对重组体内基因进行直接筛选的方法是： 
139．通过鉴定基因表达产物筛选重组体的方法是： 
(140~142)
A．RNA聚合酶                           B．末端转移酶
C．碱性磷酸酶                           D．反转录酶
E．核苷酸酶
140．能切除DNA末端磷酸基的是： 
141．能在DNA3’羟基末端进行同聚物加尾的是：
142．合成cDNA用的是： 
(143~145)
A．同聚物加尾连接                       B．人工接头连接
C．粘性末端连接                         D．缺口末端连接
E．平端连接
143．外源基因和载体DNA经过E．coRⅠ切割后的连接属于： 
144．在外源基因和载体DNA末端加同聚物后进行连接属于： 
145．在外源基因和载体DNA末端添加短核苷酸序列，人为制造粘性末端后进行连接属于： 
X型题：
146．可用于基因工程载体的DNA分子有：
A．染色体DNA                          B．病毒DNA
C．细菌DNA                            D．噬菌体DNA
E．质粒DNA
147．重组DNA技术的基本过程包括：
A．目的基因的获取                      B．PCR反应
C．克隆载体的构建                      D．目的基因与载体的连接
E．重组体分子导入受体菌
148．基因克隆又称为：
A．重组DNA                            B．重组RNA
C．DNA克隆                            D．RNA克隆
E．蛋白质复制
149．组成PCR反应体系的物质包括：
A．RNA引物                            B．Taq DNA聚合酶
C．RNA聚合酶                          D．DNA模板
E．ddNTP
150．对于重组体的筛选，属于直接选择法的是：
A．免疫化学法                          B．原位杂交法
C．Southern印迹                        D．补救标志筛选
E．抗药性标志筛选
151．对于重组体的筛选，属于非直接选择法的是：
A．免疫化学法                          B．原位杂交法
C．Southern印迹                        D．补救标志筛选
E．酶联免疫筛选
152．限制性核酸内切酶切割DNA时可产生：
A．5’粘性末端                          B．3’粘性末端
C．平末端                              D．单链缺口
E．粘性末端
153．基因工程中目的基因的来源有：
A．化学合成                            B．PCR合成
C．CDNA文库                          D．基因组文库
E．组织细胞中染色体DNA直接提取
154．基因工程中外源性基因又称为：
A．目的基因                            B．目的DNA
C．目的RNA                            D．target DNA
E．外源RNA
155．重组DNA技术中常用的工具酶有：
A．限制性核酸内切酶                    B．DNA聚合酶Ⅰ
C．DNA连接酶                          D．反转录酶
E．末端转移酶
156．使细胞获取新的遗传表型的方式有：
A．接合作用                            B．转化作用
C．转导作用                            D．转座
E．以上均可以
157．作为基因工程的载体必须具备的条件是：
A．能独立自主复制                      B．易转化
C．易检测（含有抗药性基因等）          D．具有限制性内切核酸酶的切口
E．易提取获得
158．限制性内切核酸酶识别的核苷酸序列可以是：
A．4个                                 B．5个
C．6个                                 D．7个
E．8个
159．将表达载体导入真核细胞的转染方法有：
A．磷酸钙转染                          B．DEAE葡聚糖介导转染
C．电穿孔                              D．脂质体转染
E．显微注射
160．为保证转录和翻译的顺利进行，表达载体必须具备的DNA序列应包括：
A．较强的启动子                        B．较强的衰减子
C．较强的沉默子                        D．合适的SD序列
E．核糖体结合位点
161．融合蛋白的结构中包含有：
A．N端为原核蛋白质                    B．N端为真核蛋白质
C．C端为原核蛋白质                    D．C端为真核蛋白质
E．N．C两端为原核蛋白质，中间为真核蛋白质
162．可以连接的目的基因与载体的末端有：
A．同一限制性内切核酸酶切割的粘性末端                    B．不同一限制性内切核酸酶切割的配伍末端
C．不同一限制性内切核酸酶切割的不同类型的粘性末端        D．同一限制性内切核酸酶切割的平端               
E．不同一限制性内切核酸酶切割的平端
四、问答题：
163．什么叫基因克隆？简述基因克隆的步骤。
164．限制性内切核酸酶有哪些特点？
165．简述重组DNA技术中目的基因的获取来源和途径。
166．简述α互补筛选重组体质粒细菌的原理。
167．基因工程中重组体筛选的方法有那些？
168．基因工程E．coli表达体系的表达载体必须符合那些标准？
169．常用的真核表达体系有哪些？常用于细胞转染的方法有哪些？
170．已知有一mRNA分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质？简述其过程。
171．一种可靠的DNA诊断学方法必须符合哪些标准？
172．作为基因工程的载体必须具备哪些条件？
173．什么叫基因重组？简述沙门氏菌是怎样逃避宿主免疫监视的？
[参考答案]：
一、名词解释：
1.         基因工程（gentic engineering ）是指将DNA重组体引进受体细胞中，建立无性系的过程。因此，又称为基因克隆（gene cloning）。克隆某一基因或DNA 片段过程中,将外源DNA插入载体分子所形成的复制子是杂合分子---嵌合DNA（DNA chimerase），所以又称为重组DNA（recombinant DNA）。
2.       当细胞（细菌）与细胞（细菌）相互接触时，质粒DNA就可以从一个细胞（细菌）转移到另一个细胞（细菌），这种类型的DNA转移称为接合作用。
3.       由外源性DNA导入宿主细胞，并引起生物类型改变的过程[或使宿主细胞获得新的遗传表型]称为转化作用。
4.       当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来，再次感染另一（受体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组称为转导作用。或带有宿主DNA的噬菌体或病毒，再感染另外的宿主的过程中发生的DNA转移及基因重组称为转导作用。
5.       转座即是指一个或一组基因从一个位置转倒基因组的另一个位置。可移动的DNA序列包括插入序列和转座子。故由插入序列和转座子介导的基因转移或重排称转座。
6.         转座子是可以从一个染色体位点转移至另一个位点的分散的重复序列。转座子也包括含有两个反向重复序列的侧翼，内有转座酶基因，并含有抗生素耐药基因等其他基因
7.      
8.      
9.      
10.      
11.     。

    7．  发生在 同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组 （general  recombination）。 同源重组不需要特异DNA    列，而是依赖两分子间序列的相同或类似性。
    8．  发生在 同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组 （general  recombination）。
     9．  是指含有单一DNA重组体的无性系。或指将DNA重组体引进受体细胞中，建立无性系的过程。因此，又称为基因克隆（gene cloning）。
    10．  外源DNA插入载体DNA分子所形成的具有自我复制能力的DNA分子称为复制子（ replicon ）。
11 ． 限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）是指能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
12.     DNA的核苷酸序列呈二元旋转对称结构即回文结构Palindrome（或正读反读序列相同的DNA序列）。
13.     不同限制性内切酶识别位点不同，但切割后产生相同类型的粘性末端，称为配伍末端。
14.     DNA重组技术中是我们所需要的DNA序列或基因，就称为目的基因(target gene)或目的  DNA (target  DNA )。
15.     以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA称为cDNA （ complementary DNA）。
16.     克隆载体（cloning vector ）是携带目的基因，实现目的基因的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。
17.     为使插入的目的基因可转录．进而翻译成多肽链，而特意设计的克隆载体又称为表达载体（expression vector）。即具有转录和翻译所必须的DNA序列的载体。
18.     存在于细菌染色体以外的环状DNA分子。
19.     M13噬菌体的基因间隔区插入E．Coli 的调节基因及LacZ（β-半乳糖苷酶基因）的N-端146个aa残基编码基因，其产物为β-半乳糖苷酶的α-片段。而突变型 Lac－  E．coli 可表达β-半乳糖苷酶的ω—片段（酶的C-端）， 单独的α-片段及ω-片段均无β-半乳糖苷酶的活性，当含有LacZ的 M13噬菌体转化Lac－  E．coli 细菌时， α-片段及ω-片段共同表达，宿主 Lac－  E．coli 细菌才有β-半乳糖苷酶活性，使特异的作用物变为兰色化合物，（生长的细菌为兰色）即α-互补。
20.     把生物体全部的DNA 提纯后，用限制性内切核酸酶，随机切割成许多片段，将所有片段均重组入同一类载体上，得到许多重组DNA分子，继而全部转入受体菌扩增，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝，这样生长的全部细菌所携带的所有基因组DNA片段，即为整个基因组。
21.     如克隆基因能够在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，即标志补救。
22.     将表达载体导入真核细胞的过程或方法。
23.     一个细胞或病毒所携带的全部遗传信息，或整套基因的全部DNA片段。
24.     具备接受外源DNA的能力的经过特殊方法处理的受体菌。
25.     PCR  (polymerase chain reaction ) 是一种DNA迅速大量扩增的方法，短时间内获得大量DNA。有利目的基因的获得。
26.     以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA称为cDNA，单链的cDNA再复制成双链cDNA片段，与适当的载体连接后，转入受体菌，所建立的文库称为cDNA文库。
27.     插入序列从原位迁至新位的转座方式。
28.     插入序列复制后，其中的一个复制本迁至新位，另一个保留在原位的转座方式。
29.     噬菌体DNA注入菌体内后，在宿主内迅速增殖，产生病毒颗粒，并溶解细菌。
30.     噬菌体DNA注入菌体内与细菌染色体重组成为细菌染色体的一部分。
二、填空题：
31.     接合作用；转化子用；转导作用；转座。
32.     基因重组；位点特异的重组；同源重组。
33.     插入序列；转座子。
34.     插入序列；转座子。
35.     长末端重复序列；反向末端重复序列。
36.     能独立复制；便于检测；可导入宿主细胞。
37.     4个；6个；8个；粘；平。
38.     质粒DNA；噬菌体DNA；病毒DNA。
39.     目的基因的获取；基因载体的选择与构建；目的基因与载体的拼接；重组体导入受体细胞；筛选与鉴定出阳性克隆。
40.     化学合成法；基因组DNA；cDNA；聚合酶链反应。
41.     抗药性标志选择；标志补救；分子杂交。
42.     含有大肠杆菌适宜的选择标志；具有强的启动子；含有适当的翻译控制序列；含有合理设计的多接头克隆位点。
43.     酵母；昆虫；哺乳动物细胞。
44.     转化；转染；感染。
45.     LacZ；146；β半乳糖苷酶；α互补。
46.     白；蓝。
47.     反向重复；转座酶。
48.     保守性转座；复制性转座。
49.     质粒DNA；接合作用。
50.     限制性核酸内切酶；DNA连接酶；DNA聚合酶Ⅰ；反转录酶。
三、选择题：
   A型题
        51．B  52．D  53．A  54．B  55．A  56．B  57．A  58．D  59．C  60．A  61．D  62．B  63．D  64．C  65．E  66．B  67．C 68．E   69．E  70．C  71．D  72．A  73．D  74．B  75．E  76．E  77．E  78．E  79．C  80．C  81．A  82．D  83．E  84．E 85．D  86．B  87．E  88．A  89．D  90．E  91．D  92．B  93．A  94．C  95．A  96．E  97．D  98．B  99．E  100．C  101．D 102．B  103．C  104．A  105．B  106．C  107．E  108．E  109．D  110．E
  B型题：
        111．D  112．C  113．E  114．A 115．C  116．D  117．C  118．E  119．B  120．A  121．A  122．A  123．C  124．A  125．B  126．D  127．A  128．B  129．D  130．A  131．D  132．B  133．D  134．E  135．B  136．A  137．C  138．A  139．C  140．C  141．B  142．D  143．C  144．A  145．B 
  X型题：
        146．B．D．E  147．A．C．D．E  148．A．C  149．A．B．D．E  150．B．C．D．E  151．A．E  152．A．B．C．E  153．A．B．C．D．E  154．A．B．D  155．A．B．C．D．E  156．A．B．C  157．A．B．C  158．A．C．E  159．A．B．C．D．E  160．A．C．D  161．A．D  162．A．B．C．D
四、问答题：
        163．基因克隆（gene cloning）是指含有单一DNA重组体的无性系。或指将DNA重组体引进受体细胞中，建立无性系的过程。一个完整的基因克隆过程包括： A．目的基因和载体的选择------分。B．限制性内切酶处理的基因和载体------切。C．目的基因与载体的连接------接。D．重组体导入受体细胞------转。 E．筛选转化细胞 ------筛。
        164．限制性内切核酸酶分为三类，重组DNA技术的限制性内切核酸酶为Ⅱ类。其特点为：①．识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称----即回文结构（Palindrome）。②．一些酶切割后产生粘性末端（Sticky end or Cohesive end）。另一些酶切割后产生平端或钝性末端（blunt end）。③．不同的限制性内切核酸酶识别DNA中的核苷酸长短不一，为4．6或8个。
165．的基因的获取：主要有以下几种途径：①．化学合成法：已知某种基因的核苷酸序列或根据某种基因产物的aa序列推导出该多肽链编码的核苷酸序列，再利用DNA合成仪合成。②．基因组DNA：一个细胞或病毒所携带的全部遗传信息，或整套基因的全部DNA片段。从基因组DNA文库中获得。③．cDNA文库。④．聚合酶链反应------PCR  (polymerase chain reaction )。
166．13噬菌体的基因间隔区插入E．Coli 的调节基因及LacZ（β-半乳糖苷酶基因）的N-端146个aa残基编码基因，其产物为β-半乳糖苷酶的α-片段。而突变型 Lac－  E．coli 可表达β-半乳糖苷酶的ω—片段（酶的C-端）， 单独的α-片段及ω-片段均无β-半乳糖苷酶的活性，当含有LacZ的 M13噬菌体转化Lac－  E．coli 细菌时， α-片段及ω-片段共同表达，宿主 Lac－  E．coli 细菌才有β-半乳糖苷酶活性，使特异的作用物变为兰色化合物，（生长的细菌为兰色）这就是α-互补。可用于重组体的筛选。如果目的基因插入LacZ基因内，则LacZ不表达，为白色菌落。
167．重组体的筛选方法有：①．直接法（ direct selection）：针对载体携带的某种或某些标志基因和目的基因而设计的筛选方法 称直接法。其特点是： 直接测定基因或基因表型。A．抗药性标志筛选： 如克隆载体携带有某个（些）抗药基因， 如：ampr．tetr 等。只有被转化的细菌才能在含有该抗生素的培养基生长，并形成菌落，使转化菌与非转化菌区别开。 如重组体中的外源性基因插入到标志性基因内，标志性基因则失活，通过有或无抗菌素培养基对比培养，即可区分单纯载体转化菌和重组体（含目的基因的载体）转化菌。如：将目的基因插入tetr基因中，该载体就失去tetr 抗药性，但仍有apmr 抗药性,被转化的细菌（含重组体）可在 含有apmr 培养基生长，而不能在tetr 培养基生长。也叫插入灭活法。B．补救标志（marker  rescue ）筛选：如克隆基因能够在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这就是标志补救。如： 酵母咪唑甘油磷酸脱水酶基因表达产物与细菌组氨酸合成有关。 当酵母DNA与λ噬菌体载体结合后，在转染或感染组氨酸缺陷型大肠杆菌，在无组氨酸的培养基中培养，只有含重组体的细菌能生长（因有咪唑甘油磷酸脱水酶）。再如：α－互补也是一种标志补救。C．杂交法：利用  32P 标记的探针与转移到硝酸纤维素膜上的转化子DNA或克隆的DNA片段进行分子杂交，直接选择鉴定目的基因。如：原位杂交Southern  blotting（DNA-DNA杂交；）。②．免疫学方法（  非直接法）：是利用特异抗体与目的基因的表达产物相互作用进行的 筛选。分为：免疫化学法和酶免疫检测分析。免疫化学法：原理为：将培养的转化子菌落，经氯仿蒸汽裂解，释放抗原，再将固定有抗血清（目的基因编码蛋白特异的免疫血清）的聚乙烯膜覆盖在裂解菌落上，在膜上形成抗原抗体复合物，再与 125I－IgG反应，最后放射自显影，检出阳性菌落。
168．含有大肠杆菌适宜的选择标志．具有强的启动子．含有适当的翻译控制序列．含有合理设计的多接头克隆位点。
169．真核表达体系常见的有：酵母．昆虫．哺乳类细胞等。重要的是将重组体导入细胞。即转染。（将表达载体导入真核细胞的过程）常见的转染方法有：磷酸钙转染． DEAE葡聚糖介导转染．电窜孔．脂质体转染．显微注射等。
170．已知有一mRNA分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质呢？其过程如下：首先以mRNA分子为模板，进行反转录，合成cDNA，再合成双链cDNA，扩增后与载体连接形成重组体，转染表达载体，筛选出克隆，进行基因表达即可。
171．一种可靠的诊断学方法必须符合1）能正确扩增靶基因。2）能准确区分单个碱基的差别。3）本底和噪声低，不干扰DNA鉴定。4）便于自动化操作，适合大面积．大人群普查。
172．作为基因工程的载体必须具备的条件是：能独立自主复制。易转化。易检测（含有抗药性基因等）。
173．不同DNA分子间发生的共价连接称基因重组。沙门菌为逃避宿主免疫监视，其鞭毛素蛋白的表达每经历1000代细胞即发生一次相变异（Phase  variation）。 沙门菌鞭毛素基因H1 H2分别编码鞭毛素H1 H2， H2启动序列同时启动 H2及一种阻遏蛋白的表达。阻遏蛋白可阻H1 的表达hin基因编码一种重组酶，催化H2启动序列与hin基因倒位，发生基因重组（genetic recombination）其结果是启动序列方向改变，H2及阻遏蛋白表达关闭， H1 基因表达。