- 讲师:刘萍萍 / 谢楠
- 课时:160h
- 价格 4580 元
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脱 钙
组织里存有钙盐可妨碍用常规方法制作良好切片。骨组织及钙化病灶,经过固定后,必先将钙盐除去使组织软化,才能进行常规切片。如脱钙不全则切片易撕开或碎裂并损伤切片刀刃。脱去钙盐的过程――称为脱钙。脱钙时应注意:
1.骨组织固定24小时后,锯下不超过0.5mm厚的薄骨片,再以10%福尔马林固定后进行脱钙。(未固定的组织在酸性脱钙液中受到的损伤比已固定的组织约大三倍)。骨组织过厚则需延长脱钙时间,长时间浸于强酸影响切片染色效果。
2.在不影响诊断的条件下,应将骨组织周围的软组织全部剥去。如果切片目的在于观察骨髓病变或骨组织肿瘤,最好除去一部分正常的致密的骨组织,以利于脱钙和制片。
3.脱钙前最好先将骨组织进行脱脂。
4.脱钙要彻底,脱水应充分,在脱水过程中,要注意不使其过度硬化。
脱钙剂
优质脱钙剂的标准是:
(a) 完全脱钙。
(b) 不损伤组织细胞或纤维。
(c) 不妨碍以后的染色技术。
(d) 适当的脱钙速度。
一、强酸脱钙剂
1.含甲酸脱钙液
Gooding和Stewart氏液(甲酸-福尔马林液)
配方:甲酸 5-25ml
福尔马林 5ml
蒸馏水 加至 100ml
5%的甲酸是一种良好的常规脱钙剂,速度适当,组织损害小。当甲酸成分增至25%则增快脱钙速度,加入甲醛可适当保护组织不受酸损害,但应切记,增加脱钙速度只能靠牺牲细胞微细构造来获得。
根据组织的厚度和钙化程度,在5%甲酸液内2-4天可完全脱钙,横切的肋骨需36-48小时。
2.含盐酸脱钙液
Von Ebner氏液
配方:浓盐酸 15ml
氯化钠 7.5ml
蒸馏水 加至 100ml
盐酸脱钙易使组织收缩,作用速度较快,用氯化钠作为溶剂则效果良好,牙齿脱钙时盐酸可增至10-20%。脱钙时,每日应加盐酸(0.5%)直至完成脱钙,横切的人肋骨(5毫米厚度)于36-72小时内脱钙。
3. 硝酸脱钙液
是最常用的脱钙剂,用硝酸作脱钙液的缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色,产生颜色即迅速影响脱钙速度,且组织的黄染会妨碍随后的染色反应。在硝酸内加入0.1%尿素可以防止变黄而使之无色,但尿素仅有暂时作用,一旦硝酸显淡黄时需要加入。
福尔马林-硝酸液(Clayden氏液)
配方:福尔马林 5ml
硝酸(比重1.41) 7.5-15ml
蒸馏水 加至 100ml
此处方中甲醛可部分地抑制硝酸的浸软作用,这即具有脱钙作用,又具有固定作用,硝酸脱钙迅速,组织不膨胀,掌握好脱钙时间可直接脱水,不影响染色效果。但最好先洗去硝酸。
横切人肋骨(5mm)用含7.5%硝酸液于1-2天内脱钙。
硝酸水溶液
配方:硝酸(用0.1尿素稳定) 5-10ml
蒸馏水 加至 100ml
此液用作常规脱钙剂,作用迅速,对组织不膨胀,对细胞的保存和染色比前者更好,能适用多种染色技术,但每日需要更换新鲜溶液,最好早晚各一次,一般1-3天完成。
横切人肋骨(5mm)在12-24小时内脱钙。
责编:刘卓
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