HE染色在临床病理诊断中的应用研究

 [摘要] 目的 探讨临床病理诊断中HE染色的应用价值。方法 选取750张石蜡切片进行研究，所有石蜡切片均源于该院病理科，时间在2013年2月―2016年2月，方便选择其中的200个蜡块制片给予重点观察，比较病理技术改进前后的HE染色结果。结果 胃镜活检、脂肪组织、骨组织改进后HE染色结果分别为98.36%、97.67%、96.67%，明显高于改进前81.97%、79.07%、80.00%，病理技术改进前后的HE染色结果对比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在病理诊断工作中，合格的HE切片是诊断的基石，病理科需要采取措施，促使HE染色技术得以提升，从而提高切片质量，确保病理诊断的准确性。 
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　　[关键词] 病理诊断；HE染色；应用 
　　[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）10（c）-0017-03 
　　[Abstract] Objective To explore the application value of clinical and pathological diagnosis of HE staining. Methods Convenient selection a total of 750 pieces paraffin sections were studied. All paraffin sections were source in the Department of pathology of our hospital， during February 2013 to February 2016，select one of the 200 block of wax production given key observation， comparing the improved pathology technique before and after he staining results. Results Endoscopic biopsy， adipose tissue and bone tissue of the improved HE staining results were 98.36%， 97.67%， 96.67%， 81.97%， 79.07% was significantly higher than that before the improvement， 80%， there was statistical significance comparing the pathological technique before and after the improvement of the results of HE staining （P<0.05）. Conclusion In the pathological diagnosis， qualified tissue sections with hematoxylin and eosin （HE） is the cornerstone of diagnosis， pathology need to take measures to urge the hematoxylin and eosin （HE） staining technique can be improved， so as to improve the quality of sections， to ensure the accuracy of pathological diagnosis. 
　　[Key words] Pathological diagnosis； HE staining； Application 
　　病理诊断被临床视为疾病诊断的金标准，其诊断准确性会受到多种因素的影响，例如切片染色效果、处理质量、操作人员的技巧等[1-2]。从实际的病理技术应用情况上看，在操作过程中还存在很多问题，因受到标本固定时间不合理因素的影响，导致组织脱水不彻底，对制片质量产生了很大影响[3]。为了提高临床病理诊断效果，医院必须调整HE染色操作流程，对其进行改进，该文主要分析临床病理诊断中HE染色的应用价值，选取750张石蜡切片进行研究（2013年2月―2016年2月），现报道如下。 
　　1 资料与方法 
　　1.1 一般资料 
　　选取该院病理科的750张石蜡切片（2013年2月―2016年2月）进行研究，方便选择其中的200个蜡块制片，并给予重点观察，其中肝胆4例、子宫6例、胃肠4例、子宫内膜52例、胃镜活检61例、脂肪组织43例、骨组织30例。 
　　1.2 方法 
　　HE染色：该次研究所选取的标本均源于病理科，为了确保制片质量，在取材时，操作人员必须参照取材操作规范操作，严禁取材又大又厚，影响组织脱水及制片。组织脱水、包埋、制片。HE染色具体操作方法：①切片在烤箱65℃烘烤15～30 min后入二甲苯脱蜡（3次），时间5 min/次。②梯度乙醇依次脱去二甲苯，乙醇浓度从无水乙醇-95%乙醇-85%乙醇-75%乙醇，约30 s/次，然后入自来水冲洗。③苏木精染液染色，时间在5～10 min。④经1%盐酸酒精分化，给予水洗。⑤充分流水冲洗，时间在15 min以上，在这过程中，细胞核颜色会发生改变，直到变为蓝色则可停止。若核染色过深或过浅，则需给予再分化，或可选择重新染色。⑥1%伊红液染色，时间在30～60 s，然后，自来水略洗。使用85%乙醇、95%乙醇、95%乙醇、无水乙醇脱水，每次时间控制在30 s。⑦二甲苯透明，时间为1 min/次，共3次。⑧盖片封片，将标签贴于相应位置。改进：病理科技术人员在实施HE染色操作流程中，关注可能出现的问题并找到根源，解决问题，制作合格的HE切片。 　　1.3 观察指标 
　　观察病理技术改进前后的HE染色结果，所有数据均由病理科工作人员提供，并给予比较。 
　　1.4 统计方法 
　　采用SPSS 15.0统计学软件分析数据资料，计量资料采用t检验，用（x±s）表示，计数资料采用χ2检验，用[n（%）]表示，P<0.05为差异有统计学意义。 
　　2 结果 
　　在病理技术改进前，HE染色结果还不够理想，通过对病理技术进行改进后，HE染色结果显著改善。病理技术改进前后的HE染色结果经比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。 
　　3 讨论 
　　在病理科中，常规组织染色质量会对病理诊断结果产生很大影响，影响患者病情的判读，可能导致病情被延误，耽误最佳的治疗时机，不利于改善病患的病情。在HE染色过程中，细胞核染色质量决定了HE染色质量，所以配制合格、有效的染液对于病理科技术人员至关重要[4]。病理技术人员必须掌握各式常规切片所需染液的染色原理和配制。HE染色结果会受到很多因素的影响，其影响因素包括固定时间、取材、脱水、包埋，切片质量，染色质量。组织在送检前，要先进行固定，目的在于确保活体、组织两者的形态、成分基本相似，并防止组织自溶现象的发生[5]。一旦组织原有结构消失，或者受到损坏，则会导致制片质量不佳，不利于患者病情的诊断。完成组织固定工作后，工作人员需于规定时间内，将组织送至病理室受检，一旦固定时间太长，便会致使组织变脆（或变硬），无法获取理想的切片效果，从而导致诊断结果受到影响。 
　　有研究表明[6]，在固定时，室温需控制在25℃左右为宜，若处于低温状态下进行固定，则需适度延长固定时间，浸泡固定法属于比较常用的一种方法，医院病理科可选用这种固定方式。所有的外检组织，在没有特殊情况的条件下，离体后立即固定10%中性福尔马林固定液中。在送检组织固定过程中，必须使用充足的固定液，一般情况下固定液量为组织的10倍以上，大标本不少于总体积8倍[7]。大多数组织应固定24 h以内，最长不超过48 h。操作人员在取材时，必须制定明确的取材范围，按照不同标本类型进行取材，同时选择相应的取材工具与方法，防止出现组织结构挤压的现象，否则会导致组织结构发生变化。控制取材大小和取材厚度。在骨组织取材时，要及时给予脱钙，降低制片难度。值得注意的是，脂肪组织比较特殊，取材不能过大、过厚，在制片时，需将脱水固定时间适度延长，否则会导致HE染色效果受到影响[8]。在该次研究中，所有操作均规范进行。 
　　病理科工作人员要制作出良好的切片，组织脱水是重要的环节。根据本科室工作特点设计一套脱水程序并且熟练自如的掌握是制片好坏的关键。组织的脱水不佳或者过度脱水会导致制片困难，影响HE染色结果。工作人员要定期更换脱水试剂，维护脱水机，以免影响组织脱水。良好的石蜡切片的制作也是影响HE染色的关键因素，一般石蜡切片的厚度3.5～4 μm，有特殊要求的组织可切2～3 μm。切片过厚或者过薄可导致HE染色细胞核不清晰，核浆对比不佳，从而影响诊断。 
　　为了保证HE染色质量，除了上述固定、脱水、包埋和切片外，染色也是非常重要的。染色的重要性在于试剂，要做好试剂的质量控制。工作人员要建立档案，详细记录每天的染色数量，达到规定的染色片数时，更换液体。苏木精染色液每天要过滤后使用，根据工作量，经常添加或更换脱蜡用的二甲苯。保持液体的纯净度，定期更换分化液，脱水试剂。每日填写染色质控登记表，在HE染色中，工作人员还需合理选取试剂浓度，对湿度、温度进行有效控制，提高HE染色操作的有效性、合理性、科学性，遵循各项操作流程与规范，确保各项操作的准确性，为患者病情的诊断提供更多信息。 
　　董星杏[9]分析研究病理技术HE染色在病理诊断中的应用，抽取病理科的800石蜡切片纳入研究，观察其中200例染色标本的组织学质谱，结果显示，病理技术改进前，骨组织、脂肪组织、胃镜活体检查、胃肠肝胆、子宫内膜HE染色结果分别为80.0%、82.4%、88.9%、90.0%、85.7%，病理技术改进后，骨组织、脂肪组织、胃镜活体检查、胃肠肝胆、子宫内膜HE染色结果分别为90.0%、94.1%、97.2%、96.7%、100.0%，病理技术改进以后的染色结果显著优于之前，差异具有统计学意义。通过该次研究发现，改进病理技术后，切片质量取得了明显改善，胃镜活检、脂肪组织、骨组织改进后HE染色结果分别为98.36%、97.67%、96.67%，明显高于改进前。与上述研究结论吻合，这表明在HE染色过程中，病理技术的应用非常重要，医院病理科需采取措施，促使HE染色技术提升，按照不同组织类型进行针对性的固定、脱水等操作，有利于改善切片质量，取得更好的病理诊断效果，从而提高患者病情诊断的准确性，为其疾病治疗提供依据。