医药学论文：谈灵芝代谢产物对肿瘤细胞的作用

1 材料与仪器
1.2 含灵芝的代谢产物培养基取生长于斜面固体培养基上的灵芝菌泥（约1cm2）接种于100ml液体培养基（含2%黄豆粉，2%蔗糖，0.075%的磷酸二氢钾，0.03%的硫酸镁），25℃100 r/min条件下培养5d，用滤纸过滤后得到含灵芝的代谢产物培养基。将这些培养基在-20℃条件下保存待用。
1.3 抗血清制备使用李丽华等［2,3］报道的琥珀酸酐法将含灵芝的代谢产物培养基中所有成分的羟基与小牛血清白蛋白（BSA）连接。使用连接后的化合物免疫昆明小鼠，制备抗血清。经琼脂双向扩散法测定该抗血清的效价是1∶16。
1.5 动物昆明小鼠(由河北医科大学动物中心提供)146只，体质量为18～22 g，雌雄各半。
1.6 仪器微量加样器（SOCOREX,瑞士）；电热恒温培养箱（上海福玛实验设备有限公司），离心机（国产）, Humalyzer2000型全自动生化仪，德国豪迈公司生产等。

2.2 动物分组将120只已经注射了S180的小鼠随机分为6组，每组动物各20只，分为阴性对照组、腹腔注射含灵芝代谢产物培养基组（注射产物组）、环磷酰胺（CTX）组、腹腔注射含灵芝代谢产物培养基加抗血清组（注射产物加血清组）、口服含灵芝代谢产物培养基组（口服产物组）和抗血清组。阴性对照组和正常组胃饲生理盐水0.2 ml/（kg·d）；环磷酰胺组腹腔注射环磷酰氨0.075 g/（kg·d）；腹腔注射含灵芝代谢产物培养基组给予腹腔注射灵芝代谢产物2ml/（kg·d），抗血清组给予腹腔注射抗血清2 ml/（kg·d），腹腔注射含灵芝代谢产物培养基加抗血清组给予腹腔注射灵芝代谢产物2ml/（kg·d）同时腹腔注射抗血清2ml/（kg·d），口服含灵芝代谢产物培养基组给予口服含灵芝代谢产物培养基2ml/（kg·d）。
2.4 ELISA法测定各组血清TNF-α水平应用TNF-α ELISA试剂盒（购于渤海生物公司）按说明书测定保存血清中的TNF-α水平。
2.6 统计学方法均采用SPSS10.0软件，进行t检验。
3.1 各组肿瘤质量如表1所示，阴性对照组与抗血清组肿瘤质量无差异（P＞0.05）；注射产物与血清组和环磷酰胺组无差异（P＞0.05）；阴性对照组与所有组均有差异（P＜0.05）；注射产物组与口服产物组有差异（P＜0.05），注射产物组与口服产物组有差异（P＜0.05）。
3.3 TNF-α水平如表1所示，环磷酰胺组TNF-α的水平与注射产物与血清组之间无差异（P＞0.05），正常组、阴性对照组与血清组无差异（P＞0.05），环磷酰胺组与阴性对照组有差异（P＜0.05）；注射产物与血清组与阴性组有差异（P＜0.05）。表1 各组肿瘤质量、肝功能和细胞因子水平（略）