医药学论文：探讨针刺对抑郁大鼠海马神经因子表达的影响

1材料与方法
12试剂与仪器BDNF、NGF免疫组化试剂盒购自中山生物试剂有限公司广州分公司。33'二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)显色剂，兔抗NGF和BDNF多克隆抗体：一抗(工作浓度为1∶100)、二抗、三抗，40 g/L多聚甲醛，磷酸盐缓冲液(PBS)均购自武汉博士德生物有限公司。CX21BIMSET生物显微镜(OLYMPUS公司生产)，图像分析仪(北京航空航天大学24版本)。
14治疗方法给予大鼠各种不可预知的应激刺激同时，西药组按照2 mg·kg-1·d-1剂量给予盐酸氟西汀(美国礼来公司)，将药物溶于生理盐水中灌胃，每天1次。针刺组每天应激刺激前1 h进行治疗，根据《实验针灸学》大鼠穴位定位方法取穴，选取百会、心俞、肝俞。穴位常规消毒，选用华佗牌025 mm×13 mm针灸针进行针刺。百会向尾部斜刺，进针深度约为2 mm，心俞、肝俞(左右两侧穴位交替使用，每次取单侧)斜刺5 mm，每穴均匀捻转刺激30 s，留针15 min。每天1次，共21次。
151取材方法各组大鼠在治疗21 d结束后，全部断头取脑，剥离全脑，于冰浴下迅速分离出海马，40 g/L多聚甲醛固定6 h，再依次浸入200、300 g/L的蔗糖PBS(pH 72)中，直至组织块下降到底部，恒冷冰冻切片机连续冠状切片，取海马与齿状回互包平面，片厚40 μm，直接置于01 mmol/L PBS液中，4℃冰箱保存。
16统计学方法采用SPSS 120软件分析数据，用单因素方差分析：方差齐时采用LSD法(最小显著差异法);方差不齐时采用Dunnett T3法。
正常组大鼠海马结构中，BDNF阳性细胞表达很强，广泛分布于海马的锥体细胞和齿状回的颗粒细胞层，细胞排列密集，着色深，有的有较长的突起。与正常组比较，模型组BDNF阳性细胞数量明显减少，且多数细胞呈空泡状，胞浆着色较浅。针刺组、西药组BDNF阳性细胞数显著增加(与模型组比较，P< 005)，但两组间比较，差异无显著性意义(P>005)。结果见表1、图1(见彩图页第615页)。
005)。结果见表1、图2(见彩图页第615页)。表1各组大鼠海马BDNF和NGF阳性神经元的吸光度比较
海马是边缘系统重要组成部分，参与情绪、学习、记忆、行为、免疫等调节，它的损伤在各种应激所致疾患中起关键作用。应激所致的海马树突结构重建、神经元形成的减少和细胞生存能力的下降为抑郁症患者海马损害提供了细胞学基础。