医药学论文：研究大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响

1 材料和方法
1.2 方法
1.2.2 MTT 法检测细胞抑制率 取处于对数生长期的胃癌SGC7901细胞,常规胰酶消化后制成单细胞悬液,使细胞密度为(4～5)×107/L;将细胞接种于96孔板中,每孔0.1 ml, 在37℃、5%CO2的饱和湿度条件下培养24 h，分别加入0、3、6、12、24 mg/L的大蒜素，继续培养48 h,随后每孔加入5 g/L的MTT 20 μl,继续培养4 h，倾尽上清。每孔加入二甲基亚砜0.1 ml，摇床上摇动约15 min以充分溶解,用酶标仪在波长570 nm处检测各孔光密度值(D值),计算细胞生长抑制率。每组实验重复6次。细胞生长抑制率=(1-实验组平均D值)/空白对照组平均D值×100%。
1.2.4 免疫细胞化学法检测Ki67蛋白的表达 胃癌SGC7901细胞的单细胞悬液制备同1.2.2方法，将细胞接种于预先放置盖玻片的24孔板中,放入培养箱中继续培养24 h，弃去培养液,加入含大蒜素(3 mg/L)培养液继续培养48 h，弃去培养液,用PBS冲洗3次,取出盖玻片,放入冷丙酮中固定20 min。免疫细胞化学染色严格按SP试剂盒操作说明书进行。Ki67蛋白的阳性表达表现为细胞核出现黄色或棕色颗粒。每一个玻片随机选取5个高倍视野(×400),在每个视野下随机观察200个细胞,计算细胞阳性率。并取5个玻片的平均值。
2 结 果
2.2 大蒜素对胃癌SGC7901细胞凋亡的诱导作用 大蒜素(3 mg/L)处理胃癌SGC7901细胞12、24和48 h后，细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P< 0.05，表2)。
3 讨 论
本实验采用不同浓度的大蒜素作用于人胃癌SGC7901细胞后，细胞增殖抑制率测定结果显示肿瘤细胞生长受到明显抑制，且呈浓度依赖性。以低浓度大蒜素作用于人胃癌SGC7901细胞，即可诱导细胞发生凋亡，12、24和48 h细胞凋亡率可达2.41%、7.30%和15.44%，均明显明显高于对照组。免疫细胞化学法证实反映胃癌细胞增殖的Ki67蛋白的表达也发生相应的改变：低浓度大蒜素组胃癌SGC7901细胞中Ki67蛋白的表达降低，提示胃癌细胞的增殖能力下降，进一步说明大蒜素可抑制肿瘤细胞的增殖。