医药学论文：对苏木素与胰蛋白酶作用的性质研究

1 器材
1.2 药品牛胰蛋白酶（生化试剂），上海海洋生物技术有限公司产品；苏木素（生物染色剂BS），成都科龙化工试剂厂产品；硼酸（分析纯 ），成都科龙化工试剂厂产品。
2.1 苏木素对胰蛋白酶活性影响在恒温水浴箱中将酪蛋白、胰蛋白酶和苏木素预热，按酶活性的测定方法，在胰蛋白酶与酪蛋白的酶解反应体系中加入不同体积的苏木素溶液，测定苏木素对酶活性的影响。胰蛋白酶活性及抑制常数测定参照文献［8］方法操作。
室温条件下，在1 cm×1 cm的石英比色皿中准确加入1.0×10-4mol/L的胰蛋白酶溶液3.0 ml，扫描190～350 nm的吸收光谱。然后用微量注射往其中准确加入1.0×10-3mol/L的苏木素溶液10 μl，混匀，静置2 min后扫描190～350 nm的吸收光谱。扫描1.0×10-3 mol/L苏木素溶液190～350 nm的吸收光谱。
2.4 苏木素对胰蛋白酶作用的同步荧光将"2.3"项下所配的温度为298 K的溶液，固定激发和发射波长间隔△λ分别为20 nm和60 nm，同时扫描激发和发射波长并记录同步荧光光谱。
3.1 苏木素对胰蛋白酶活性的影响苏木素对胰蛋白酶有抑制作用，当苏木素浓度为4.5×10-4 mol/L时，苏木素使胰蛋白酶的相对活性下降到70.2%，抑制率为29.8%。在不同的底物浓度（40，30，20，10 g/L酪蛋白溶液）下，按酶活性的测定方法测定酶的反应速度，其结果以1/v对抑制剂量用Dixon作图法求出Ki=6.13×10-5mol/L，抑制类型为非竞争性抑制。

3.4 荧光猝灭常数及猝灭机理
当猝灭体分子和荧光物质分子之间形成新的复合物而发生静态猝灭时，服从Lineweaver-Burk方程。20，25℃时以（F0－F）－1对［C］－1拟合Lineweaver-Burk方程，由图4可见该双倒数呈现良好的线性关系，再次确定在20，25℃时为静态猝灭。