医药学论文：FXR1P与Btf相互作用的鉴定

【摘要】 目的 验证FXR1P与Bcl-2 相关转录因子1 (Bcl-2-associated transcription factor 1，Btf )蛋白质的相互作用。方法 将利用酵母双杂交系统进行胎脑cDNA文库筛选出的蓝色克隆提取酵母质粒后转化大肠杆菌Top10，利用氨苄抗生素抗性筛选转化有AD/Library质粒的转化子，扩增后小量提取质粒，醋酸锂法小量转化酵母Y187，AD/Library/Y187与pGBKT7/FXR1/AH109进行一对一酵母配合，用β-半乳糖苷酶滤膜分析检测，将阳性克隆的AD/Library质粒测序，对测序结果进行生物信息学分析。结果 阳性克隆测序结果生物信息学分析显示为Btf基因。结论 FXR1P与Btf有相互作用。
【关键词】 酵母双杂交系统；蛋白质相互作用；FXR1P


脆性X综合征是最常见的X连锁智力低下疾病，也是家族性智力低下最常见的原因之一。主要临床表现有不同程度的智力障碍、青春期后巨睾丸，部分患者有面部特征性表现，如长脸、招风耳、高腭弓以及类似自闭症的表现。1991年Verkerk 等［1］从X脆性位点分离并克隆到该病的致病基因：脆性X智力低下1号基因（fragile X mental retardation 1，FMR1），其编码蛋白FMRP的缺失或低表达导致疾病的发生。1995年Zhang Y 等［2］克隆出两个定位于常染色体（3q28和17p13.1）、与FMR1基因非常相似的基因，命名为脆性X相关基因1（FXR-1）和脆性X相关基因2（FXR-2），分别编码FXR1P和FXR2P，它们和FMRP有较高的同源性。有学者运用酵母双杂交体系、免疫亲和层析以及基质辅助的激光解吸电离质谱方法，相继发现了一些FMRP相互作用蛋白，包括脆性X相关蛋白FXR1P和FXR2P、核仁素、核FMRP相互作用蛋白（nuclear FMRP interacting protein，NUFIP）、核糖体蛋白、泛素结合酶9（ubiquitin-conjugating enzyme 9，UBC9）、胞浆FMRP相互作用蛋白（cytoplasmic FMRP interacting proteins，CYFIP）、核苷酸二磷酸激酶亚基B、T/G错配糖苷酶（T/G mismatch-spicific DNA thymine glycosylase，TDG）、82-FIP（82-kD FMRP interaction protein）［3～5］。FXR1P是否也与这些蛋白发生相互作用？还与其他哪些蛋白发生相互作用呢？故筛选并研究FXR1P的相互作用蛋白，不但可以初步了解其功能，还可以为脆性X综合征的发病机制提供新的依据。本文通过进一步验证酵母双杂交文库筛选过程中得到蓝色克隆，确认FXR1P和Btf的相互作用，为FXR1P下一步的功能研究奠定基础，为脆性X综合征发病机制的研究提供新的依据。