医药学论文：表达结核分枝杆菌Ag85B与GST融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护研究*

【摘要】 目的 评价构建的结核DNA疫苗pVS85BG免疫的小鼠体外产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力。方法 利用基因操作技术将结核菌Ag85B基因和谷胱甘肽S转移酶基因插入pVAX1载体构建表达结核菌Ag85B和GST融合蛋白的DNA疫苗pVS85BG。将雌性C57BL/6小鼠分成5组，每组20只，分别用pVS85BG、pVAX1、pIL2S和PBS分别免疫，以相同的剂量加强免疫2次，均间隔2周。另一组用BCG(105CFU)皮内注射免疫1次。每组的10只鼠在最后一次加强免疫后，无菌取脾培养，上清供检测细胞因子用。另外10只小鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击，于2周后取脾、肝和肺进行培养结核菌并进行菌落计数。结果 pVS85BG免疫组的鼠脾淋巴细胞的培养上清中的mIL-2和mIFN-γ的平均含量分别为(339.9±59.4)pg/ml和(432.1±74.4)pg/ml，显著高于3个阴性对照组（P< 0.001），与BCG免疫组差异无显著性(P＞0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10差异无显著性。pVS85BG免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌菌落数分别为(32954.2±4457.5)CFU/g，(32748.0±3634.4)CFU/g和(31741.7±7293.7)CFU/g，分别低于pVAX1、pIL2S和PBS等3个阴性对照组的相应器官的结核菌载量（P< 0.001），同时也显著高于BCG免疫对照组。结论 构建的DNA疫苗pVS85BG能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答，免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力显著增强。
【关键词】 结核； DNA疫苗； 细胞因子； 免疫保护