医药学论文：去甲硫氨酸环境对胃癌化疗疗效的作用

【摘要】 目的 探讨去甲硫氨酸（Met）环境是否提高化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。方法 将30例新鲜人胃癌组织制成单细胞悬液，分别培养于Met-Hcy+和Met+Hcy-培养基中，并在不同培养基中分别加入5-FU、DDP化疗药物，用MTT比色法检测各组细胞的抑制程度。结果 Met-Hcy+培养基分别与5-FU、DDP联合时，可显著提高化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。结论 Met-Hcy+培养基联合各化疗药物，可提高对胃癌细胞的杀伤作用。
【关键词】 甲硫氨酸依赖；胃癌原代细胞；化疗
【Abstract】 Objective To study the effect of methionine dependence in combination with chemotherapeutical agents on human primary gastric cancer cells.Methods 30 fresh gastric cancer samples were managed to single cell suspensions and then were cultured in Met-Hcy+ and Met+Hcy- medium separately，then 5-FU，DDP were added，the inhibition rate of tumor cells in different culture media was examined by microcytotoxicity(MTT) assay.Results Methionine dependence in combination with chemotherapy enhanced obviously the killing capacity of each chemotherapeutical agents on human primary gastric cancer cells.Conclusion The combined application of Met-Hcy+ medium and different chemotherapeutical agents could enhance the antitumor effect of chemotherapy on human primary gastric cancer cells.
【Key words】 methionine dependence；primary gastric cancer cells；chemotherapy
近年来的研究发现，某些肿瘤细胞在用甲硫氨酸（Methionine，Met)前体--同型半胱氨酸替代Met的培养基中生长受阻，而正常细胞生长良好，提示肿瘤细胞的生长具有依赖Met的特性［1］。当Met依赖性的肿瘤细胞处于Met饥饿状态时，再加上周期特异性化疗药物，可望获得较好的抑制肿瘤细胞增殖的效果。本研究将人胃癌原代细胞置于Met-Hcy+和Met+Hcy-培养基中，并在不同培养基中分别加入5-FU、DDP化疗药物，观察胃癌细胞的存活率和判断去甲硫氨酸（Met）环境能否提高化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 人胃癌原代细胞取自入住本院外科的进展期胃癌病人的胃癌组织，共30例，其中腺癌28例，黏液癌2例。
1.2 细胞培养和MTT测试
1.2.1 标本采取和制备 手术时，胃癌标本一经离断，立即在无菌操作下采取胃癌组织，用机械法制成单细胞悬液，调整细胞浓度为2×105/ml。
1.2.2 培养基 以不含Met的RPMI-1640培养液（GIBCO公司）和已透析小牛血清（GIBCO公司）为基础，配制成不含Met但含有同型半胱氨酸（Hcy）的Met-Hcy+培养液和含Met但不含Hcy的Met+Hcy-培养液，见表1。

表1 Met-Hcy+培养基和Met+Hcy-培养基的补充成分 (μmol/L)

1.2.3 化疗药物溶液配制 分别以Met-Hcy+培养基和Met+Hcy-培养基为基础配制5-FU和DDP药物溶液，其中，5-FU溶液的浓度为20μg/ml，DDP溶液的浓度为6μg/ml，均为与细胞接触的终浓度的2倍。
1.2.4 接种 将每例胃癌原代细胞接种于96孔板上，100μl/孔。再分别加入以Met-Hcy+培养液和Met+Hcy-培养液为基础、分别含有5-FU（20μg/ml）、DDP（6μg/ml)的溶液，100μl/孔，使每孔总液量达到200μl。与细胞接触的5-FU终浓度为10μg/ml（10μg/ml为体内血峰浓度)；DDP终浓度为3μg/ml（3μg/ml为体内血峰浓度)。每种药物组设3个复孔。不加化疗药物组为对照组。
1.2.5 培养 将各组细胞置于37℃、含5%CO2的细胞培养箱中，培养48h后，每孔加5mg/ml四唑蓝（Tetrazolium Salt)2μl，4h后，加入10%酸化十二烷基硫酸钠溶液（含10%异丁醇）100μl，培养过夜。
1.2.6 MTT法测试 用自动酶标仪（318-Microplate Reader)比色，波长492nm，得到每孔的光密度值（OD），每组取3孔的平均值，表示该组活细胞的数量。
1.3 统计学方法 用配对t检验比较同一药物、同一肿瘤细胞在不同培养基中生长的受抑程度。以P< 0.05为差异有显著性。