医药学论文：胆囊癌对化疗药物敏感性的研究

【摘要】 目的 研究化疗药物对胆囊细胞的敏感性。方法 应用MTT法及流式细胞仪，选择6种化疗药物作用于胆囊癌细胞株，进行化疗药物敏感性的检测。结果 MTT法及流式细胞法测定6种化疗药物对胆囊癌细胞的敏感性，由高至低依次为顺铂(DDP)34.77±3.53、丝裂霉素(MMC)33.25±3.40、卡铂(CDB)15.73±4.50、阿霉素(ADM)15.52±3.56、甲氨蝶呤(MTX)14.5±2.13、长春新碱(VCR)8.5±1.95。结论 6种化疗药物以DDP、MMC较敏感，CDB、ADM、MTX次之，VCR最差。
【关键词】 胆囊癌；化疗；流式细胞仪
【Abstract】 Objective To study the sensitivity of the primary gallbladder carcinoma to chemotherapeutic drugs.Methods Analyzed by MTT methods and cytofluorometry，the sensitivity detection of 6 kinds of chemotherapeutic drugs to gallbladder carcinoma cell strain.Results All of the six antitumor drugs was evaluated by MTT methods and cytofluorometry，they were (from high to low)：cisplatin(DDP)34.77±3.53，mitomycin C(MMC)33.25±3.40，carboplatin(CDB)15.73±4.50，adriamycin(ADM)15.25±3.56，methotrexate(MTX)14.5±2.13，vincristine(VCR)8.5±1.95.Conclusion DDP and MMC are more chemosensitive than CDB，ADM and MTX especially than VCR.
【Key words】 gallbladder carcinoma；chemotherapy；cytofluorometry
原发性胆囊癌是一种恶性程度高且预后较差的胆系恶性肿瘤，占消化系统恶性肿瘤的第五位，近年来的统计结果表明，其发病有增高趋势［1］。虽然在诊断技术，及治疗方法上有所发展，但治疗5年生存率仅有5%～10%的水平。手术治疗仍然是目前胆囊癌治疗的首选方法，但手术切除率低依然是困扰胆囊癌治疗方法的主要原因，因此，药物化疗就显得至关重要。但目前针对胆囊癌的化疗效果欠佳，且国内外尚无统一、公认显效的联合用药方案。我们选择了5种化疗药物，采用MTT及流式细胞仪(FCM)方法检测其药物敏感性，以期找到临床合理运用化疗方案的科学依据，从而使化疗个体化。本实验研究的结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞来源 胆囊癌细胞系(山东医科大学外科陈博教授提供)。
1.1.2 药物 顺铂、阿霉素、丝裂霉素、卡铂、长春新碱、甲氨蝶呤。
1.1.3 试剂及仪器 RPMI 1640培养基及小牛血清由北京中山公司提供，四甲基偶氮唑盐( MTT ) 及二甲基亚砜( DMSO )由Sigma 公司提供，自动酶标读数仪( 国产DG-3022 )，流式细胞仪 FACScort (Becton Dickinson)。
1.2 方法 （1）胆囊癌细胞在含100%小牛血清的1640培养基，37℃，5% CO2 培养箱中生长。取对数生长期的细胞以每孔5×104个细胞接种于96孔细胞培养板中，37℃，5% CO2条件下培养48h。把所有细胞分为6个实验组和1个对照组，6种不同浓度的化疗药物浓度为［ 药物浓度计算公式为：药物浓度(μg/ml)=60×D/5000÷50%×103，D为临床用药剂量(mg/kg·d)，60为平均成人体重(kg)，50%为红细胞压积，乘103后将mg换算成μg］DDP 40μg/mg、MMC 2μg/ml、ADM 40μg/ml、CDB 300μg/ml、MTX 5μg/ml、VCR 1μg/ml。分别加入6个实验组中，使每孔最终体积为200μl，每个浓度设3个复孔。以无化疗药物的细胞液为空白对照，作用48h后，每孔加1mg/ml 的 MTT 0.1ml；继续培养4h后加DMSO溶液0.1ml，温育30min；在自动酶标读数仪上比色，波长570nm，测出每孔OD值(吸光度值)，结果以高度敏感(抑制率＞70% )，中度敏感 ( 抑制率 50%～70% )，不敏感 ( 抑制率< 50% )判定。抗肿瘤药物对肿瘤细胞抑制率 = (1- 实验组吸光度值/肿瘤细胞对照组吸光度值)×100%。（2）流式细胞仪药敏检测法按（1）所计算浓度分别温育6组胆囊癌细胞48h，并以不加药物的RPMI 1640细胞培养液作阴性对照，收集胆囊癌细胞，PBS洗涤后，4℃下75%乙醇固定12h以上，离心除去乙醇，PBS洗涤，各组加入10mg/ml RNA 酶溶液 150μl，37℃水浴30min，加入碘化丙啶( PI )，用300目尼龙网过滤后4℃下放置15min，转而进行FACScan激光流式细胞仪检测，资料经Cell Quest软件收集和分析。
1.3 统计学方法 采用SAS统计软件进行Student-t 检验。
2 结果
2.1 MTT法测定化疗药物的平均抑制率 不同的化疗药物对胆囊癌细胞的抑制率不同，体外MTT的试验表明，胆囊癌细胞对顺铂及丝裂霉素有较高的敏感性。见表1。