医药学论文：RP

【摘要】 目的 建立状元深海龙酒中丹参酮ⅡA的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法测定，用C18柱（4.0×250mm，5μm），以甲醇－水（70:15）为流动相，检测波长270nm。结果 丹参酮ⅡA的线性范围为0.06～0.18mg/ ml；丹参酮ⅡA平均回收率为99.81%，RSD=1.08%(n=5)。结论 所用方法测定样品灵敏度高，重复性好，能有效地控制状元深海龙酒的质量。

 

【关键词】 状元深海龙酒；丹参酮ⅡA；反相高效液相色谱法；含量测定

 

状元深海龙酒是由海龙、丹参、羊腰子等22味药组成的复方中药制剂，具有补肾益精功效。用于肾精亏损，腰膝酸软，倦怠无力，健忘失眠，阳痿早泄等证候者。笔者对处方中的丹参进行了含量测定，丹参主要含有丹参酮类成分,而以丹参酮ⅡA含量最高，现代药理研究成果表明，以丹参酮ⅡA为代表的丹参酮类成分具有明显的药理活性，所以在含量测定时首先考虑丹参酮ⅡA，对于它的含量测定方法较多，参考药典［1］中丹参药材的含量测定方法和有关文献［2］，最终采用反相高效液相色谱法建立了适合本制剂的含量测定方法，并经过方法学考察及3批样品测定，结果表明该测定方法简便可行、重现性、精密度良好，回收率符合要求，整个试验过程可操作性强，能够客观地控制本品的含量，现将研究情况报告如下。

 

1 仪器与试药

 

1.1 仪器 Waters 600E液相色谱仪；Waters 600泵，Waters2997光电二极管矩阵检测器；millennium32色谱工作站。FA1004电子分析天平(上海良平仪表有限公司)，KQ3200超声清洗器(中国昆山市超声仪器有限公司) 。丹参酮ⅡA（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110821-200406）

 

1.2 试剂及试样 甲醇为色谱纯、其余试剂均为分析纯、水为重蒸水、状元深海龙酒(自制)。

 

2 含量测定

 

2.1 色谱条件与系统适用性 C18柱（4.0×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水 （70:15）；流速：0.8ml/min；检测波长270nm；柱温：室温；进样量:10μl。理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于2000。

 

2.2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥36h的丹参酮ⅡA对照品适量置于棕色量瓶中,加甲醇制成每1ml含丹参酮ⅡA 8μg的溶液。

 

2.3 供试品溶液的制备 精密量本品50ml，水浴蒸至约10ml，加入预先处理过的中性氧化铝约10g，小心搅拌均匀至干，装入中性氧化铝柱（100～200目，1.5cm）中，以无水乙醇进行洗脱，收集洗脱液约150ml，水浴蒸干，放冷，用适量甲醇溶解残渣，转移至5ml棕色量瓶中，并定容至刻度，摇匀，取续滤液，即得。

 

2.4 线性关系考察 分别精密吸取上述丹参酮ⅡA(C=0.008mg/ml)对照品溶液5、8、10、15、20μl进样，按上述色谱条件测定峰面积, 以对照品的进样量(μg)作为自变量(x), 对照品峰面积作为应变量(y),进行回归分析。结果回归方程为y=116.37x +1.3312，ｒ=0.9996。结果表明丹参酮ⅡA进样量在0.06～0.18μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

 

2.5 稳定性试验 取样品，按供试品制备方法制备，分别于0、2、4、8h测定峰面积, 结果峰面积的RSD=0.84%，实验结果表明，本品在8h内稳定性良好。

 

2.6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液20μl，连续进样5次,记录峰面积，结果峰面积的RSD=1.30%,结果表明仪器精密度良好。

 

2.7 重复性试验 取同一批号(050201)本品6份，依供试品制备方法制取样品，依法测定含量，结果6份样品的含量(μg /ml)分别为0.4316、0.4426、0.4411、0.4411、0.4421、0.4298，平均含量为0.4381μg /ml，RSD=1.31%，结果表明,本方法重复性良好。

 

2.8 加样回收率试验 取已知含量的样品（批号：050201，丹参酮ⅡA含量为0.4316μg /ml）加入一定量对照品，按供试品制备方法制备样品，测定总量，计算回收率，结果见表1。表1 丹参酮ⅡＡ加样回收率试验结果结果表明,本方法回收率良好。

 

2.9 样品测定 取样品，依供试品制备方法制取供试品溶液，依上述色谱条件测定含量。批号为050202、050203、050205三批样品,其丹参酮ⅡＡ含量分别为: 0.4622、0.4705、0.4652μg /ml。

 

3 讨论

 

（1）本方法供试品溶液制备方法简便易行，在该色谱条件下丹参酮ⅡA峰分离效果良好，回收率符合要求，结果理想。