医药学论文：钆喷酸葡胺脂质体的制备与研究

【摘要】 本文采用改良逆相蒸发法-膜挤压法相结合将水溶性顺磁性造影剂钆喷酸葡胺制成小单室脂质体（SUV），方法简单、重现性好，显示了可进一步工业化的良好前景。激光散射法测得脂质平均粒径为195nm。4℃避光放置6个月，各项理化指标基本无变化。对制剂的急性毒性研究结果表明，钆喷酸葡胺及钆喷酸葡胺脂质体的ivLD50值分别为8.00mmol/kg和9.56mmol/kg，这提示脂质体可降低药物的毒性。而影像学结果进一步证明了钆喷酸葡胺脂质体具有靶向性。

 

【关键词】 钆喷酸葡胺；脂质体；制备研究

 

Research and preparation of liposomal Gd-DTPA

 

【Abstract】 We used a modified reverse-phase rotary evaporate-extrution method to obtain liposomes containing Gd-DTPA. We had developed a modified one of this technique. The method was simple and good reproduce. It was ideally suitable for scaling-up for production purpose. The mean diameter of liposomes was 195nm, which was determined by laser scattering，this liposomal formulation had no evident effects under 4℃. The iv LD50 of free and liposomal Gd-DTPA was 8.00mmol/kg and 9.56 mmol/kg, respectively. This suggested that Gd-DTPA liposomes had a proven effect in reducing toxicity. Result of imaging confirmed liposomal Gd-DTPA possesed target for liver and spleen.

 

【Key words】 Gd-diethylenetriamine pentaacetic acid;liposomal;preparation and research

 

1982年由德国先灵（Schering AG）公司的威曼等人制备成功的钆喷酸葡胺［（NMG）2-Gd-DTPA］是研究和应用最多的造影剂，并在1984年报告了首次应用于人体的结果。由于它能在正常和病变组织间增加额外对比度，使MRI诊断的敏感性和特异性均得以提高，故很快被人们所接受。钆喷酸葡胺是细胞外离子型造影剂［1］，它主要用于颅脑、脊柱及全身的磁共振成像，特别是对脑的造影是安全有效的［2～6］。由于它主要通过肾脏快速代谢［1,7］，能与细胞外空间快速平衡及快速的肾清除，不适用于肝、脾肿瘤的成像［8～10］。在分布上无特殊的靶器官，或者说它是一种无专一性分布的造影剂。为了提高肝、脾肿瘤的成像效果，使钆喷酸葡胺具有器官靶向性，可用脂质体作为药物的载体来达到此目的。在这方面的研究国外已有报道［11～14］，实验证明了包封于脂质体中的钆喷酸葡胺具有肝、脾器官靶向性。本实验以豆磷脂和胆固醇为成膜材料，制备了钆喷酸葡胺脂质体，并对其体内外稳定性进行了研究，以期为钆喷酸葡胺脂质体的进一步开发以及将来应用于临床提供实验依据。

 

1 仪器与材料

 

1.1 仪器 高速离心机（沈阳理化仪器厂），Zetasizer 3000（英国Malvern仪器公司），ZM-420透射电镜（Philips），NDJ79旋转式粘度计（同济大学机电厂），DL302-1电热恒温箱（上海天淞五金厂）。

 

1.2 材料 Gd2O3（北京有色金属研究院），DTPA（北京福星化工厂），甲葡胺（北京北陆医药有限公司），精制大豆磷脂（上海油脂一厂），胆固醇（上海生化试剂厂），钆喷酸葡胺注射液（先灵〈广州〉药业有限公司），生理盐水（双鹤药业），其他试剂均为分析纯。

 

2 方法与结果

 

2.1 钆喷酸葡胺脂质体的制备 参考文献初步拟定以下基础处方［15］：300mg卵磷脂，75mg胆固醇及0.1%量的VE，制成10ml。

 

2.1.1 改良逆相蒸发法 精密称取300mg卵磷脂，75mg胆固醇及0.1%量的VE，用4ml氯仿和8ml异丙醚溶解。将Gd-DTPA溶于10ml缓冲液中，从中取4ml该缓冲液于油相中，涡流震荡3min，室温水浴中超声5min，把制得的W/O型乳液于50℃水浴中温浴1min，然后于30±0.5℃水浴中减压旋转蒸发至形成凝胶状的物质，再加入剩余的6ml含药的缓冲液，升高水浴温度至35±0.5℃，减压旋转蒸发，得到分散均匀的脂质体混悬液。

 

2.1.2 膜挤压法 将上述脂质体混悬液在一定的压力下，依次通过0.8、0.45、0.22μm微孔滤膜，每次重复6遍，最终得到均匀乳状的钆喷酸葡胺脂质体。

 

2.2 处方优化 根据单因素考察结果，首先确定缓冲液的离子强度，处方成分为磷脂、胆固醇、十八胺和药物，把磷脂（PC）用量、胆固醇（Chol）用量、十八胺（SA）用量及成膜时温度（T）作为4个考察因素。选择U10（104）均匀表可得10组处方，利用人工神经网络系统进行处方优化，主要考察指标为脂质体的外观、KE值及沉降体积比F，最终确定最佳处方为：磷脂250mg，胆固醇50mg，十八胺20mg，药物浓度0.5M，制备成脂质体10ml。