医药学论文：通络方剂对糖尿病大鼠体内抗氧化系统的影响及对胸主动脉血管内皮的保护作用

【摘要】 目的 初步研究通络方剂对糖尿病大鼠体内抗氧化系统的影响及对血管内皮的保护作用。方法 链脲佐菌(STZ)素诱导的糖尿病大鼠给予通络方剂治疗6周后，测定血清中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）及谷胱甘肽（GSH）含量并在电镜下观察胸主动脉血管内皮病理切片改变。 结果 与正常对照组相比，各模型组SOD、GSH明显下降，阳性对照组大鼠MDA含量增加，差异有统计学意义；通络方剂干预组的大鼠血清中SOD活性和GSH明显高于阳性对照组，T-AOC与CAT亦有升高但不显著。电镜下观察到通络方剂干预组较阳性对照组大鼠内皮细胞损害有较明显减轻。结论 通络方剂能提高糖尿病大鼠机体抗氧化能力，抑制脂质过氧化，对糖尿病所致的大鼠血管内皮损害具有一定的保护作用，进一步证明糖尿病血管病变属于络病范畴，通络方剂有望成为糖尿病慢性并发症的防治药物。
【关键词】 通络方剂；糖尿病大鼠；抗氧化；血管内皮
【Abstract】 Objective To study the effects of Tongluofangji on the antioxidative system and aorta thoracica endothelia in diatetic rats.Methods The diabetic rats of STZ-induced were treated with Tongluofangji for six weeks， the plasma SOD， CAT， T-AOC， MDA and GSH were measured. The pathologic changes of the aortic thoracic endothelia were observed with the eletronic microscopy.Results Compared with the normal control group the plasma activity of SOD and GSH reduced significantly in the other three groups(P< 0.05). Plasma level of MAD in positive control group increased significantly. The plasma activity of SOD and GSH were higher in Tongluofangji group than those in positive group. The plasma levels of T-AOC and CAT also rose in Tongluofangji group while there was no statistic significance between the groups. There was no significant change in MDA. The lesions of aorta thoracica endothelia in Tongluofangji group were significantly relieved than positive group(P< 0.05).Conclusion Tongluofangji could improve the antioxidative ability， inhibit lipid peroxide and protect the aorta thoracica endothelia in diabetic rats，and further proved diabetic angiopathy belongs to Luobing.Tongluofangji would be a new kind of drugs for the prophylaxis and treatment of the diabetic chronic complication.
【Key words】 tongluofangji；antioxidative；diatetic rats；endothelia
络病理论的建立是中医药学发展的里程碑，依据络病理论，络病的临床证候为：络气郁滞、络脉瘀阻、绌急、瘀塞。而糖尿病慢性并发症血管病变均有这些证候，表现为四肢乏力麻木、视物模糊、心悸胸闷等，提示络病与糖尿病血管病变有内在的联系(脉络－血管系统病)，应属络病范畴［1］。而通络治疗也可改善这些血管并发症，但作用机制未明。糖尿病慢性并发症发病的统一机制学说认为：引起糖尿病各并发症的四条共同通路：多元醇通路激活、蛋白质非酶糖化增加、PKC(蛋白激酶C)激活、己糖胺途径激活实质上都是高糖诱导的超氧化物过表达的结果，氧自由基生成增多导致的氧化应激是糖尿病并发症发生、发展的重要因素。而持续高糖状态下，线粒体活性氧基生成增加可能是糖尿病各种并发症发生的中心环节［2，3］，近年也有学者认为氧化应激是引起胰岛素抵抗糖尿病、动脉硬化的共同发病机制，即"共同土壤学说"。本研究采用通络方剂治疗糖尿病大鼠，并与抗氧化剂褪黑素（Melatonin）进行比较，拟从氧化应激方向研究通络方剂对糖尿病大鼠体内抗氧化系统的影响及对血管内皮的保护作用。
1 材料与方法
1.1 主要材料 褪黑素（Mel）、链脲佐菌素（STZ）购自美国Sigma公司，通络方剂超微颗粒由人参、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鳖虫、赤芍等药物组成，由以岭药业提供。超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）、脂质过氧化物的产物丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒购自南京建成公司，血糖测定采用罗氏公司血糖测定仪。雄性SD大鼠（体重160～180g），购自上海中科院实验动物中心。
1.2 DM大鼠模型的制备与处理 大鼠适应性饲养5天，禁食18h后先按体重随机分为两组，一组（15只）大鼠单次腹腔注射STZ 60mg/kg诱发糖尿病，另一组（5只）大鼠同时腹腔注射等体积的上述缓冲液作为对照。注射STZ的大鼠于注射3天后，空腹血糖持续高于16．7mmol/L，尿糖呈强阳性的大鼠确定为糖尿病大鼠。再将糖尿病大鼠随机分为3组，加正常对照组共4组：正常对照组(N)、少量胰岛素处理的阳性对照组(D)、通络方剂处理的糖尿病组(T)和褪黑素处理的糖尿病组(M)，并开始给药处理。通络方剂组每天上午灌服通络方剂水溶液1g/kg，褪黑素组每天上午灌服褪黑素溶液5mg/kg，其余两组均灌服等体积稀释液，连续处理6周。动物自由进食饮水，每周测量体重。实验结束前大鼠过夜禁食后乙醚麻醉下摘除眼球取血留取血清，迅速打开胸腔找到胸主动脉，剪断后取出滴注4％戊二醛缓冲液同时顺血管纵轴切成0.5cm×0.5cm小片，并立即置于戊二醛固定。
1.3 指标检测方法 测血糖采用葡萄糖氧化酶法。血清标本用可见光法检测CAT活性；用TBA法测定MDA，用DTNB法定量测定GSH含量；比色法测SOD活性与总抗氧化能力。
1.4 统计学方法 实验数据采用(x±s)表示，各组间数据显著性检验均采用不配对t检验处理。
2 结果
2.1 一般情况 造模组注射STZ后1～2天出现多饮、多尿，第3～4天多食明显。通络方剂处理组及模型对照组大鼠多饮多尿症状较重，精神萎靡、毛发凌乱暗淡易脱，体重下降。见表1。