医药学论文：HPLC测定VC银翘片中连翘苷的含量

【摘要】 目的 建立VC银翘片中连翘苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定，用C18柱（4.0mm×250mm，5μm），以乙腈-水（25:75）为流动相，检测波长277nm。结果 连翘苷的线性范围为0.4～3.0μg；连翘苷平均回收率为99.28%，RSD=2.81%(n=5)。结论 所用方法测定样品灵敏度高，重复性好，能有效地控制VC银翘片的质量。

 

【关键词】 VC银翘片；连翘苷；HPLC；含量测定

 

1 仪器与试药

 

仪器：Waters 600E液相色谱仪；Waters 600泵，Waters2997光电二极管矩阵检测器；Millennium32色谱工作站。FA1004电子分析天平(上海良平仪表有限公司)，KQ3200超声清洗器(中国昆山市超声仪器有限公司) 。连翘苷（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110821-200406）。

 

试剂及试样: 乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸水,VC银翘片（自制）。

 

2 含量测定

 

2.1 色谱条件［1］ 色谱柱Symmetryshield(Rp18 4.6mm×250mm) ;乙腈-水（25:75）为流动相；检测波长277nm；流速1ml/min；柱温23℃。

 

2.2 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀，即得。

 

2.3 样品供试液的制备 精密称取VC银翘片除去糖衣研细后的粉末3.500g，置居塞锥形瓶中，精密加入甲醇45ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理25min，放冷至室温，再称定重量，补加甲醇至原重量。摇匀，滤过，弃去初滤液。精密量取续滤液15ml，蒸至近干，加中性氧化铝1.5g拌匀，加至中性氧化铝柱（100～120目，3g，内径1～1.5cm）上，用70%的乙醇240ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至15ml容量瓶中，并用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液为供试品溶液。

 

2.4 系统适用性试验 分别精密吸取对照品溶液， VC银翘片供试液，缺连翘的阴性样品供试液各10μl，注入HPLC仪，按上述色谱条件测定。

 

2.5 线性关系考察［2］ 分别精密吸取对照品溶液2、3、5、10、15μl，按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积对进样量（μg）回归，得回归方程C= 1.5812×10-6-0.04196，相关系数r =0.9999，表明连翘苷在0.4～3.0μg之间线性关系良好。

 

2.6 精密度试验 精密吸取VC银翘片供试液10μl，连续进样5次，记录峰面积，结果峰面积的RSD=0.85%,结果表明仪器精密度良好。

 

2.7 重复性试验 取VC银翘片样品5份，按供试品制备方法制备样品，精密吸取10μl，测定含量。结果分别为0.1789mg/片、0.1784mg/片、0.1781mg/片、0.1782mg/片、0.1786mg/片，平均含量为0.1784mg/片，RSD为0.18%。结果表明,本方法重复性良好。

 

2.8 稳定性试验 按重复性试验中的1号样，分别在2、4、6、8、12、24h测定，RSD为0.63%，结果表明，本品在24h内稳定性良好。

 

2.9 回收率试验 取已知含量的VC银翘片（C=0.1784mg/片）加入一定量对照品，按供试品制备方法制备样品，测定总量，计算回收率，结果见表1。 表1 回收率试验

 

2.10 样品测定 取批号为050313、050201、04122三批样品,依供试品制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量。其连翘苷含量分别为:0.1785mg/片、0.1780mg/片、0.1790mg/片。

 

3 讨论

 

(1)本方法供试品溶液制备方法简便易行，在该色谱条件下连翘苷峰分离效果良好，回收率符合要求，结果理想。

 

(2)本品采用中性氧化铝柱洗脱的方法除去杂质,把对设备的损害尽可能降到最低程度。

 

(3)根据对流速的考察,发现当流速为1.0ml/min的时候，连翘苷分离效果更好,出峰时间更适中。